Duolink®原位精简操作指南 - 荧光

 

1. 封闭
将封闭溶液添加至样品中。
孵育
• 去除封闭溶液k
     
2. 一抗
将一抗在适当的缓冲液中稀释,并添加至样品中。

孵育

• 在合适的缓冲液清洗两次,每次5分钟
     
3. PLA® 探针
将两份PLA探针,以1:5的比例在适当的缓冲液中稀释,并添加至样品中。

37°C孵育60分钟

• 用1 x洗涤液A清洗2次,每次5分钟
     
4. 连接
在H2O中以1:5的比例稀释连接储液。在该溶液中以1:40比例稀释连接酶并将混合物添加至样品中。

37°C孵育30分钟

• 用1 x洗涤液A清洗2次,每次2分钟
     
5. 扩增
在H2O中以1:5的比例稀释扩增储液。在该溶液中以1:80比例稀释聚合酶并将混合物添加至样品中。

37°C孵育100分钟

• 用1 x洗涤液B清洗2次,每次10分钟
• 用0.01x洗涤液B清洗1分钟
     
6. 成像准备
使用含有DAPI的Duolink原位封固剂加载样品,等待15分钟,然后在荧光或共聚焦显微镜下进行分析。
     

: 使用没有盖玻片的开放液滴反应,并在加湿室中进行所有孵育。 使用与您的反应区域所对应的体积,请参阅 sigma.com/duolink的《反应体积指南》。
请使用冷冻块将酶从冷冻室(-20ºC)中取出。
应在摇床上以最小体积(70毫升),并轻微摇晃进行清洗。

 

材料