FICOLL 400*

产品编号:F4375

CAS编号:26873-85-8

Ficoll 400是通过蔗糖和表氯醇的共聚形成的高度支化的聚合物。Ficoll 400完全是非离子的。由于富含羟基,Ficoll 400非常亲水,且极易溶于水。Ficoll 400最常见的应用是作为密度梯度介质,用于分离和隔离真核细胞、细胞器和细菌细胞。密度范围可高达1.2 g/ml。它还被用于各种其他应用。

 

 物理特性

外观:白色至浅黄色粉末

干燥失重:不超过5%1

分子量:400,000 +/- 100,000,由本征粘度确定1

比旋光度:20°C时 +56.5°(C = 水中1%)1

本征粘度:约0.17 dl/g1

包括NaCl的可透析材料:小于1%1

斯托克斯半径:约10 nm1

与蔗糖不同,Ficoll的溶液具有相对较低的渗透度。尽管如此,Ficoll在水性溶液中的密度与蔗糖相当。

因为Ficoll具有大分子量,可透析材料含量低,所以它对细胞膜的渗透性比蔗糖低得多。因此,可以预期细胞在Ficoll梯度中比在蔗糖梯度中以较低的密度收集。由于其较低的膜渗透性和渗透压,在Ficoll中分离通常可以更好地保持细胞功能和形态。

 

 储存 / 稳定性

Ficoll 400以粉末形式在室温下妥善保存可有5年保质期。

 

 溶解度 / 溶液稳定性

在水中可以达到50%(w/v)的浓度。应在不断搅拌下缓慢加入Ficoll。

我们测试1g Ficoll 400在10 mL去离子水中的溶解度,得到的是澄清至轻微浑浊的、无色至淡黄色的溶液。 

Ficoll在碱性和中性溶液中稳定。当pH值低于3时,它迅速水解,特别是在高温下。 

Ficoll可以在中性pH、110℃下高压灭菌30分钟。 

应避免使用强氧化剂和还原剂。

 

 操作步骤

离心

Ficoll 400可用于所有类型的离心机转子的梯度离心,也可用于单位重力分离。对于离心,不连续和连续梯度都可以。不连续梯度有两个主要优点:首先,Ficoll 400密度的突然变化,意味着在不同密度层之间的界面处的急剧变化条带中存在分离的细胞。这样,用移液器就能很容易地移除样品。其次,密度差异很大的细胞只需用两个密度层即可容易地分离。这是通过选择密度来实现的,这些密度将阻止一种或多种细胞类型进入较低的相,将这些细胞类型隔离在界面处。

如要估算特定应用所需的密度,请参阅下表

 

来源 浮力密度 条件
1.05 100,000xg,16小时
色素细胞 1.07 195,000xg,36小时
肝细胞 1.10-1.15 6,000xg,2小时
成纤维细胞 1.05 8,000xg,1小时
Ehrlich腹水癌细胞 1.07 1,400xg,45分钟

 

下面是Ficoll密度随浓度变化的曲线。

下面是Ficoll密度随浓度变化的曲线。

准备不连续的梯度:

  1. 在缓冲液或等渗蔗糖溶液(0.25 M)中制备Ficoll 400,其浓度应能分离目标材料。在Ficoll 400中,大多数细胞和细胞器的浮力密度在1.0至1.2 g/ml之间。通常两层梯度就足够了。在该步骤制备的溶液可以储存在冰箱中,但应该在室温下使用。
  2. 在标准离心管中,制层(约1 cm深),密度最大的层在最下面。
  3. 注意不要弄混梯度层,小心地将样品放在最上层。离心前,用玻璃棒轻轻搅拌样品和最上面的Ficoll 400层消除之间的界面。

在离心过程中,各种颗粒将聚集在Ficoll层内或之间,这取决于它们的密度。完成离心后,移除各相,然后从感兴趣的部分中除去Ficoll。用缓冲液稀释,然后离心,重复几次这个循环,以从分离的细胞和细胞器中除去Ficoll。用蒽酮反应可以估算样品中残留的Ficoll 400量2

在某些情况下,可能需要连续或线性密度梯度。这可以用梯度混合器容易地制备。对于简单的分离,可以使用不含梯度的均质Ficoll 400溶液。通过逐步增加离心速度来完成分离。Ficoll也被用于区带离心研究3

密度梯度单位重力沉降法被广泛用于分离对离心敏感的细胞。具有相似密度但不同尺寸的细胞也可以用单位重力法有效分离4,5,6

Ficoll-Hypaque密度介质(Histopaque)

要求使用Ficoll-Hypaque的应用使用Ficoll和泛影酸钠的混合物。我们提供三种不同密度的预制混合物,它们分别是Histopaque-107710831119

核酸杂交

Ficoll 400是用于北方和南方印迹分析的Denhardt溶液的成分。Ficoll在核酸杂交过程中减少材料与硝酸纤维素膜的非特异性结合7

我们提供Denhardt溶液(产品编号:D2532)50X浓缩液,经测试用于核酸杂交。典型的杂交溶液需要5倍浓度的Denhardt溶液。

免疫学应用

Ficoll 400已被用作半抗原载体,并且与二硝基苯酚、三硝基苯酚和异硫氰酸荧光素缀合,目的是增强小鼠的初级免疫应答。可以很容易地制备具有一系列取代水平和最小毒性的缀合物8,9

化学成分确定的细胞培养基

Ficoll可以单独或者与血清源生长因子一起使用,以支持原代培养物和已建立的细胞系的生长10,1110,11

浓缩透析

Ficoll 400可用于通过透析浓缩溶液,因为其高分子量可防止其穿过透析膜。渗透压将水吸过膜进入Ficoll 400溶液中,因此有效地浓缩敏感材料1

电泳

连续流电泳通常需要在电解质中使用稳定剂。Ficoll 400经常用于这种应用12,13

相分区

相分区法基于表面特性分离细胞。Ficoll 400在两相系统中与聚乙二醇结合使用,在三相系统中与葡聚糖和聚乙二醇结合使用14,15

生理输液和细胞稳定化溶液

Ficoll被添加到生理盐水输液中以监测血管中的蛋白质排泄。用含有30% Ficoll加0.5 M蔗糖的溶液可稀释玻璃化小鼠胚胎17。用含有4.7% Ficoll 400的Tyrode溶液可灌注分离的大鼠肾脏18

* Ficoll是Pharmacia的注册商标。有关物理性质和应用的信息来自Pharmacia。

 

 相关产品



     

 参考文献

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  2. Scott, T.A. and Melvin, E.H., Anal. Chem., 25, 1656 (1953).
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  13. Platsoucas, C. D. et al., Cell. Immunol., 51, 238 (1980).
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 关于细胞分离的参考文献

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