良好的细胞库操作实践

Cook Book 2010 年 9 月第 12 卷

细胞培养实验基础技术手册第 2 版良好的细胞库操作实践

在连续培养或延长培养中维持细胞系是不好的做法,因为:

  • 微生物污染的风险
  • 关注特征的丧失(例如表面抗原或单克隆抗体表达)
  • 遗传漂变,特别是在已知具有不稳定核型的细胞中(例如 CHO,BHK 21)
  • 如 MRC-5 等人二倍体细胞因寿命延长而丧失细胞系
  • 与其他细胞系交叉污染的风险
  • 消耗品和人员成本增加

所有这些潜在的风险因素可以通过如下所述的细胞库系统的实施来尽量降低。这种类型的系统被称为分层库系统或主单元库系统(参见  图 3)。在最初进入实验室时,应将新的细胞培养物视为潜在的污染源,例如窝藏细菌、真菌和支原体,并应在检疫条件下进行处理,直至证明此类微生物污染物为阴性。初次扩增后,在制备主细胞库之前,应将 3-5 安瓿作为标记物冷冻。然后根据预期的使用水平,将其中一个标记库存安瓿解冻并扩增以产生 10-20 安瓿的主细胞库。

分层细胞库系统的示意图

图 3 。分层细胞库系统的示意图:

该主细胞库 (2-3) 的安瓿应分配用于质量控制,包括确认该库的细胞计数和活力是可接受的,并且该库不含细菌、真菌和支原体。还可能需要额外的测试(如病毒筛选和真实性测试)。一旦这些测试顺利完成,应该解冻并培养一个来自主细胞库的安瓿以产生一个工作细胞库。这个库的规模将再次取决于所设想的需求水平。在使用培养物进行常规实验或生产之前,还需要进行质量控制测试(细胞计数和活力以及不存在微生物污染物)。在这个阶段,确认主细胞库和工作细胞库的基因完全相同也是非常重要的。

该库系统的实施确保:

  • 材料质量始终如一
  • 使用相同传代数范围的培养物进行实验
  • 需要时细胞只出于培养状态
  • 原始细胞系特征得以保留


 注

  1. 准备用于主细胞库和工作细胞库的安瓿数量取决于对其使用的预测需求。
  2. 取样用于质量控制的安瓿数量取决于库的规模。最好在使用前对 5-10% 的库进行测试。
  3. 工作细胞库中的安瓿应按顺序使用,使培养细胞保持不超过预定数量的细胞倍增。这个数目在具有有限寿命的细胞系(例如二倍体细胞系)中是最少的。
  4. 工作细胞库应从主细胞库的安瓿中补充。完成该操作的时间应该足够,以便实现质量控制。
  5. 在原始主储存器数量降至 5 安瓿以下之前,应准备新的主细胞库。
  6. 进行的质量控制测试小组组成取决于预期用途,例如监管部门可能需要额外的测试,如病毒筛选和核型研究。


 你知道吗?

在连续培养或延长培养中维持细胞系并不是好的做法。