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通过p24(病毒外壳蛋白)ELISA法测定慢病毒滴度


 简介

根据ZeptoMetrix的p24试验,我们确定每毫升慢病毒的转导单位(TU/mL)。通过使用来自Didier Trono的转换因子,将p24的浓度转换为病毒滴度来确定滴度计算方法。每pg p24抗原中有大约1×104个慢病毒的物理微粒。根据ELISA试验结果,每pg p24抗原中有100个转导单位(TU)。


 材料

  • 靶向选定基因的慢病毒
  • 来自ZeptoMetrix的p24 ELISA
  • 计算器或电子表格程序


 实验方案

  1. 稀释样品750到3000倍。
  2. 使用p24 ELISA试剂盒,按照制造商的说明进行操作。
  3. 永远用空白对照使读版器“归零”。
  4. 永远使用p24标准曲线进行校准。
  5. 使用两种独立的稀释液用于制作标准曲线,包括五种浓度和浓度为0的p24。
  6. 将标准曲线绘制成p24浓度比OD450。
  7. 拟合标准曲线应依从R2> 0.95。
  8. 确定斜率m和截距b。(您也可以下载并使用附件中的电子校准表格。)
  9. 根据以下公式计算稀释病毒的滴度TU / mL(您也可以下载并使用附件中的 电子表格。)

实验方案


 注意事项

下载附件中的电子表格(95Kb)以计算TU/mL。
转换因子推导:

a.(2×103个分子)×(每PP的24×103 Da p24)=(48×106
b. 48×106 / Avogadro常数=(48×106)/(6×1023)= 8×10-17 g p24 / PP
c. 每1×10-16克p24约有1PP
d. 每pg p24有1×104 PP
e. 每1000PP有100TU