微生物生长实验方案


 微生物生长实验方案

分子生物学指南里可以找到更多的实验方案与指南。
 

 大肠杆菌的培养

所需材料:
 

试剂 设备
纯大肠杆菌培养物 柜式培养箱(37°C)
LB – Miller 摇床培养箱(37°C)

LB – Miller板

培养皿,无菌
  培养瓶,无菌
 

大肠杆菌的悬浮培养

制备LB培养基:称重适量粉末培养基,将其加入到无将其加入到无菌瓶的水中。
将肉汤高温高压灭菌,并冷却至室温

将肉汤高温高压灭菌,并冷却至室温。或者可以使用即用型LB培养基)

在层流室中,将约1 mL的培养一夜的大肠杆菌培养物转移至瓶子中。

用无菌棉(非吸附型)塞密封瓶口,切勿塞紧。

在37℃连续摇动孵育过夜。

 

接种大肠杆菌

制备LB琼脂:称重适量粉末培养基、琼脂和水,将其加入到无菌瓶中。
将培养基高温高压灭菌,并冷却至刚好不烫手的温度。
在层流室中,将约25-30 mL的LB琼脂倒入无菌板中。
将板静置于层流室中凝固,盖子略微打开。

(这些板也可以在4°C下倒置存放以备将来使用)

(或者可以使用即用型LB琼脂板)
用无菌接种环轻轻刮擦冷冻大肠杆菌甘油原液的表面。 用无菌接种环从培养板中取出大肠杆菌菌落。

加入10-100 μL大肠杆菌悬浮培养物,并再加一个LB琼脂板。

在LB琼脂板上划擦接种环。

使用无菌玻璃涂布器将培养物铺在整个培养板上。

 
将培养板在37℃下倒置孵育一夜。

 

 高级实验方案

接种噬菌体M13

所需材料:

试剂 设备
纯大肠杆菌培养物 柜式培养箱(37°C)
LB琼脂EZMix™ (产品编号:L7533) 水浴(47°C)
适当的选择抗生素 培养皿
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(产品编号:I6758) 15 ml聚丙烯培养管(无菌)
X-gal(产品编号:B9146)  
氯化镁  

 

制备纯大肠杆菌培养物:将单个菌落接种到5mL LB或YT培养基中。
在LB或YT培养基中制备10倍连续稀释的M13噬菌体原液。

在无菌试管中,制备补充有5mM MgCl2的LB琼脂或YT培养基;在47°C平衡;添加适量的X-gal和IPTG溶液。

加入100 μL纯细菌培养物连续稀释的M13噬菌体原液,温和涡旋混合。

将含有X-gal和IPTG的LB琼脂或YT培养基倒入含有感染细菌的试管中,温和涡旋混合。

将内容物转移至培养板中,并旋转以均匀分布受感染的细菌。
静置培养板使其凝固,然后在37℃下倒置孵育。
M13噬菌体的淡蓝色斑块出现在细菌生长的菌苔上。

 

以下是Sigma-Aldrich提供的细菌肉汤成分:
 

细菌肉汤成分 细菌肉汤成分 形式
Y0875 Select Yeast Extract 粉末
N4767 N-Z-Amine® EKC
Y1626 Select Yeast Extract, EZMix™ powder EZMix™
T2559 EZMix™ Tryptone

 

 材料

     

 参考文献