用于分子生物学实验方案的氯化硝基四氮唑蓝

货号N6639N6876

CAS RN 298-83-9
EC 206-067-4

别名:对硝基蓝四唑氯化物,对硝基四唑蓝,NBT,硝基BT

 

产品描述

NBT主要通过合成来制备。1,2其最常见的应用是在免疫印迹实验中检测碱性磷酸酶。3

NBT还被用作其他酶促反应的氧化还原指示剂,其中包括脱氢酶4、苏氨酸脱氨酶5、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶6、聚丙烯酰胺凝胶上的磷酸果糖激酶7、聚丙烯酰胺凝胶上的氧化酶8、以及戊糖分流脱氢9。NBT的氧化还原和半波电位也已被确定。10,11

NBT也被用作血液样本中细菌感染的比色指示剂12

 

注意事项和免责声明

本产品仅供研发使用,不适用于药物、家庭或其他用途。有关危险和安全处理方法的信息,请参阅安全数据手册。

 

制备说明

NBT在水中的溶解度为 10 mg / ml,在乙醇中为5 mg / ml,在2-甲氧基乙醇中为20 mg / ml13。溶于水中的10 mg/ml储存液在黑暗中可2-8 °C稳定保存1-2周。

 

存储/稳定性

在2-8°C避光条件下,NBT的保质期为3年。

 

操作步骤

硝基蓝四唑(NBT)与碱性磷酸酶底物5溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐(BCIP)一起用于免疫印迹5和免疫组织学14的染色过程。该底物系统能够产生不溶的NBT二甲双胍终产物,其颜色为蓝色并且可以在视觉上观察到。

免疫印迹的标准实验方案如下:

1.        制备底物缓冲液:0.1M Tris、100mM氯化钠、5mM MgCl2,用HCl调节pH至9.5。

2.        在水中制备10mg / ml的NBT储备溶液。

3.        制备50mg/ml BCIP(产品号B6149)水溶液。

4.        将33ml 50 mg/ml BCIP水溶液和330 ml 10 mg/ml NBT储备液加入10 ml的底物缓冲液中。

5.        在用BCIP / NBT底物溶液处理之前,用溶于清洗缓冲液(非磷酸盐)中的碱性磷酸酶缀合物漂洗样品。在显色期间用试剂覆盖整个样品。

6.        在室温下用BCIP / NBT试剂孵育样品约10分钟。不同样品和操作程序可能会影响显色所需的时间长度。

7.        监控显色过程以避免显影过度。用蒸馏水冲洗样品以停止显色。

 

产品概况

分子式:C40H30N10O6 · 2Cl

分子量:817.64

熔点:205 °C1,189-192 °C2 (分解)

消光系数:

      260nm:E1%= 740(水溶液)13

      257nm:摩尔消光系数= 61,300(在水中)15

 

材料

 

     

 

参考文献

  1. Kwan-Chung, T., et al., Syntheses of some pnitrophenyl substituted tetrazolium salts as electron acceptors for the demonstration of dehydrogenases. JACS, 78, 6139-6144 (1956).
  2. Karmarkar, S.S., et al., Synthesis of p-nitrophenyl substituted tetrazolium salts containing iodine and other groups. JACS, 81, 3771 (1959).
  3. Blake, M.S., A rapid, sensitive method for detection of alkaline phosphatase-conjugated antiantibody on Western blots. Anal. Biochem., 136, 175 (1984).
  4. Fine, I.H. and Costello, L.A., The use of starch electrophoresis in dehydrogenase studies. Meth. Enzymol., 6, 958 (1963).
  5. Feldberg, R.S. and Datta, P., Threonine deaminase: a novel activity stain on polyacrylamide gels. Science, 170, 1414-1415 (1970).
  6. Criss, W.E. and McKerns, K.W., Purification and partial characterization of glucose 6-phosphate dehydrogenase from cow adrenal cortex. Biochemistry, 7, 125-134 (1968).
  7. Brock, D.J.H., Purification and properties of sheep liver phosphofructokinase. Biochem. J., 113, 235- 242 (1969).
  8. Feinstein, R.N. and Lindahl, R., Detection of oxidases on polyacrylamide gels. Anal. Biochem., 56, 353-360 (1973).
  9. Altmann, F.P., The use of eight different tetrazolium salts for a quantitative study of pentose shunt dehydrogenation. Histochemie, 19, 363-374 (1969).
  10. Horwitz, J.P., et al., Substrates for Cytochemical demonstration of enzyme activity. II. Some Dihalo-3-indolyl phosphates and sulfates. J. Med. Chem., 9, 447 (1966).
  11. Karmarkar, S.S., et al, Preparation of nitrotetrazolium salts containing benzothiazole. J. Org. Chem., 25, 575-585 (1960).
  12. Bergmeyer, H. U., Methods of Enzymatic Analysis, 3rd ed., 1, 198 (1983).
  13. Green, F.J. (ed.) The Sigma-Aldrich Handbook of Stains, Dyes & Indicators (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI), p. 523 (1990).
  14. Park, B.H., et al., Infection and nitrobluetetrazolium reduction by neutrophils. A diagnostic acid. The Lancet 2, 532-4 (1968).
  15. Altman, F.P., Tetrazolium salts: a consumer's guide. Histochemical J., 8, 471 (1976).