HDP1096 Perfecta3D® 96孔悬滴板实验方法

板处理及球状体形成

图1. 悬滴板组件:

 

注意!通过按住托盘长边的中央标签来携带板组件

步骤:

  1. 向板以及托盘周围一圈并由插入的隔板所分隔的储液槽(图1)内加入水或缓冲液。每个板储液槽区内加入2 mL而托盘储液槽区加入1 mL
    注意:如果液体是用来填充储液槽,则板的倾斜可能会导致液体的溢出从而造成悬滴液污染。
    可选:制备每板6 mL的0.5-1.0%琼脂糖水溶液或缓冲液溶液,加热至琼脂糖熔化并让溶液冷却到~50 °C。按上述加入缓冲液或水的方法将预热的琼脂糖加入到储液槽中。
  2. 制备相应浓度的悬浮液。可根据每个悬滴液约为30至50 uL的体积进行相应的计算。例如,如果每个50 uL的液滴中期望含有5000个细胞,则将细胞悬浮液稀释至100个细胞/uL。超过50 uL将会导致液滴不稳定,因此我们的建议起始体积为40到45 uL
  3. 通过吸取30到50 uL的细胞悬浮液并从板的顶部加入到每孔而制备悬滴(图2)。悬滴应该形成并固定在板的底部。
  4. 盖上板盖并将组件防止在组织培养箱中。在数小时内,单个的细胞应当就会开始聚集并最终形成球状体。球状体的形成时间会随着细胞类型而变化。关于培养的维持,请草考培养基更换的实验方法
 
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图2. 悬滴形成

 

材料