佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯 分子生物学试剂实验方案

货号 P1585

CAS RN 16561-29-8
别名:PMA,TPA

 

产品描述

T细胞活化通常由细胞表面受体与其特定配体分子的相互作用触发。这种结合事件通过磷脂酶C (PLC)触发肌醇磷脂快速水解成二酰基甘油和肌醇磷酸。二酰基甘油是蛋白激酶C (PKC)活化和肌醇磷酸的变构激活剂,二者能够继而触发Ca++的释放和活化,从而导致一系列更多的介导T细胞活化的细胞反应。这些细胞反应之一是白细胞介素-2(IL-2)的产生和分泌。具有类似于二酰基甘油结构的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯也可以活化PKC。

Jurkat细胞是已知产生IL-2的白血病T细胞系。在正常生长条件下,Jurkat细胞中几乎不产生IL-2。PMA通过激活PKC,可激活T细胞并刺激产生低水平的IL-2。当Jurkat细胞受到PMA和共刺激剂(如PHA)的刺激时,IL-2的产生会大大增加2。 植物血凝素可通过非特异性结合细胞表面受体复合物而引发低水平的T细胞活化和IL-2产生。 PMA和PHA的联合作用可导致IL-2的产生和分泌大大增加。

 

注意事项和免责声明

本产品仅供研发使用,不适用于药物、家庭或其他用途。有关危险和安全处理方法的信息,请参阅安全数据手册。

 

存储/稳定性

将产品储存在0°C以下。所有储液应储存在-20°C避光保存。

 

产品概况

可溶于乙醇和DMSO。

适用检测:使用在1μg/ ml植物血凝素(PHA)和50 ng / ml PMA存在条件下生长的Jurkat细胞进行测试。IL-2产量> = 15,000 pg / 106Jurkat细胞。

 

操作步骤

将2.5 ml Jurkat细胞(1×106个细胞/ ml)和2.5 ml新鲜培养基(含有10ml / l青霉素-链霉素和10%胎牛血清的RPMI 1640培养基)加入25 cm2的培养瓶中。以下添加物一式两份。

a. 对照 - 无添加物

b. 1μg/ ml PHA对照 - 加入10μl PHA储备液(0.5 mg / ml PHA溶于过膜除菌的PBS中)

c. 1μg/ ml PHA + 50 ng / ml PMA - 10μl PHA储备液+2.5μl PMA储备液(100μg/ ml PMA溶于DMSO中)

将培养瓶在37℃下孵育24小时。 离心后,使用人白细胞介素-2 ELISA测试试剂盒检测培养基上清液中IL-2的产生。PMA + PHA测试组培养物中IL-2 的产量为>= 15,000 pg IL-2 / 106Jurkat细胞。PHA对照组培养物中IL-2 的产量为<3,000 pg IL-2 / 106Jurkat细胞。未添加的对照组的产量为<50 pg IL-2 / 106Jurkat细胞。

 

材料

     

    

参考文献

  1. Weiss, A., et al., J. Immunol., 133, 123 (1984)
  2. Manger, B., et al., J. Clin. Invest. 77, 1501 (1986)