藻类培养基—植物组织培养方案

藻类培养基主要由浓缩溶液或粉末盐混合物制备而成。浓缩溶液组分较完整,包含维生素,应冷冻保存。而粉末培养基则可以灵活地自定义培养基的最终组分。这类用于制备水生物种生长培养基的粉末由“富集”盐混合物和完全合成的盐混合物组成。将粉末或浓缩溶液分别加入淡水或海水中以制备富含淡水或海水的培养基。为了制备合成海生生长培养基,将粉末添加到组织培养级淡水中。已公布的水生物种生长培养基配方通常含有碳酸氢钠。SIGMA的粉末混合物中不包含碳酸氢钠,应视需要添加在培养基中。

 

从包装粉末制备

粉末培养基极易吸湿,必须防止空气中的水分对其潮解。单个包装的全部粉末应尽可能在打开后立即使用。不建议以浓缩形式制备培养基,否则一些盐复合物可能会沉淀。添加到培养基中的补充剂可能会影响其保质期和储存条件。制备培养基的基本步骤如下:

1.   量取终体积约90%的淡水或海水量,例如: 终体积为10 L则量取9L。选择一个容量是终体积两倍的容器。

2.   在搅拌水的同时加入粉末状培养基并搅拌直至完全溶解。某些情况下可能需要加热将粉末溶解。

3.   用少量水冲洗粉末原包装,以去除痕量的粉末。添加到步骤2的溶液中。

4.   根据需要,加入碳酸氢钠(NaHCO3)或其他缓冲液;搅拌至溶解。添加所需的热稳定补充剂(例如蔗糖,琼脂,维生素,生长素,细胞分裂素等)

5.   加入更多的水使培养基达到终体积。

6.   根据需要,使用NaOH,HCl或KOH将培养基调节至所需pH。

7.   如果加入胶凝试剂,则加热直至溶液澄清。

8.   根据需要,在高压灭菌之前(或之后)将培养基加样到培养皿中。高压灭菌后加入热不稳定的组分。

9.   液体培养基可使用0.22μm过滤器过滤灭菌,或在有效的高压灭菌器中以1 kg / cm2(15 psi),121°C灭菌,灭菌时间按照培养基灭菌方案中所述。

10.   待培养基冷却后使用。

 

粉末状培养基和碱性盐混合物仅供实验室使用。不适用于医用,家庭用或其他用途。

 

自备材料

  • 海水,植物细胞培养测试(货号S9148
  • 去离子组织培养级水(货号W3500
  • 1 N盐酸(HCl)(货号H9892
  • 1 N氢氧化钠(NaOH)(货号S2770
  • 碳酸氢钠,经植物细胞培养测试(货号 S5761

生长素,细胞分裂素,碳水化合物,胶凝剂和其他补充剂见生物化学部分。

 

储存

将干燥培养基储存于0-5°C的干燥器中。粉末培养基变质可以通过以下方式识别:1)颜色变化;2)粉末中的造粒,结块或颗粒物质;3)pH变化;或4)正确使用时无法促进生长。

 

培养基中的沉淀

植物组织培养基中随着时间推移会产生沉淀。将沉淀物进行分析检测(Sigma,未发表的数据;Dalton等,1983)。它们由微小的浅黄白色颗粒组成。沉淀物的分析表明其主要含铁、磷酸盐和锌。导致沉淀物产生的可能原因是亚铁离子不可避免地氧化成三价铁离子以及未螯合的铁离子的存在。当磷酸铁的含量超过其溶解度时,也会发生沉淀。 尚未有报道表明沉淀物会对植物组织培养物的生长和发育产生有害影响。

 

培养基组分表

B5282 – 改良的基础淡水营养液

C3061 – 蓝藻BG-11淡水溶液(50X)

G0154 – Guillard’s(f / 2)海水富集溶液

G9903 – Guillard’s(f / 2)海水富集溶液

 
组分(毫克/升) B5282 C3061 G0154 G9903
氯化铵        
生物素     0.005 0.005
硼酸 11.42 2.86    
氯化钙二水合物 25.0 36.0    
柠檬酸   6.0    
六水氯化钴     0.01 0.01
六水硝酸钴 0.49 0.0494    
一水硫酸钴        
五水硫酸铜 1.57 0.079 0.01 0.01
EDTA(游离酸) 50.0      
二水EDTA二钠     4.36 4.36
EDTA二钠镁   1.0    
EDTA铁钠        
柠檬酸铁铵   6.0    
无水氯化铁        
六水氯化铁     3.15 3.15
七水硫酸铁 4.98      
ß-甘油磷酸二钠        
七水硫酸镁 75.0 75.0    
四水氯化镁 1.44 1.81 0.18 0.18
三氧化钼 0.71      
六水氯化镍 0.003      
氢氧化钾 31.0      
碘化钾 0.003      
磷酸二氢钾 175.0      
磷酸氢二钾 75.0 40.0    
碳酸钠   20.0    
氯化钠 25.0      
九水偏硅酸钠       15.0
二水钼酸钠   0.39 0.006 0.006
硝酸钠 250.0 1500.0 75.0 75.0
磷酸二氢钠     4.411 4.411
亚硒酸钠 0.002      
氯化锡 0.001      
盐酸硫胺素     0.1 0.1
Trizma碱(TRIS)        
三水硫酸钒 0.0022      
维他命B12     0.005 0.005
七水硫酸锌 8.82 0.222 0.022 0.022
  B5282 C3061 G0154 G9903
制备1L所需克数 n/a n/a n/a n/a
*真空干燥后的重量。

   

材料