用于RNA电泳的预制琼脂糖凝胶

产品描述

用于RNA电泳的Sigma预制琼脂糖凝胶适用于分离大小为0.25-10 kb的RNA。这种8孔凝胶是使用1X MOPS缓冲液制备的1.25%无RNase琼脂糖(货号A9539),不添加变性剂。凝胶配方不含甲醛,建议用于总RNA、体外RNA转录子和Northern印迹分析。

在凝胶上样之前,通常不需要RNA变性。但是如果怀疑RNA有明显的二级结构,则应从操作步骤部分选择一种方案使RNA变性。

 

注意事项及免责声明

该产品仅供实验室使用,不可用于药物、家庭或其他用途。多数电泳试剂属于危险品,相关警告声明参见产品标签。在操作过程中,务必穿戴手套和护目镜等个人防护装备,详见安全技术说明书。

 

储存

在室温下(18 °C-25 °C)平放保存。有效期见产品标签。不得冷冻。

 

产品概述

适用于Bio-Rad Mini-Sub®、Hoefer Minnie the Gel-Cicle® 、Life Technologies Horizon® 58以及Sigma submarine小型凝胶(货号E0638)电泳装置。

 

凝胶描述

凝胶盒尺寸:6.8 cm x 10.2 cm

凝胶尺寸:6.0 cm x 9.5 cm

凝胶厚度:5.5 mm

样品规格:凝胶含8个样品孔,每孔最多容纳15 µl样品

 

所需试剂(自备)

  • 10X MOPS电泳缓冲液,货号M5755(0.4 M MOPS,pH约为7.0,0.1 M醋酸钠,10 mM EDTA)
  •  RNA上样缓冲液,货号R4268(含50 µg/ml溴化乙锭)或货号R1386(不含溴化乙锭);62.5% (v/v)去离子甲酰胺,1.14 M甲醛,200 µg/ml溴酚蓝,200 µg/ml二甲苯蓝,1.25 X MOPS-EDTA-醋酸钠,或
  • 凝胶上样液,货号G7654(40% (w/v)蔗糖,0.25% (w/v) 溴酚蓝,0.25% (w/v) 二甲苯蓝FF)

特定变性方法所需的其他试剂:

甲酰胺,货号F9037

二甲亚砜,货号D8418 

乙二醛,货号128465

混床树脂(用于甲酰胺或乙二醛的去离子化),货号M8032


去离子流程需要使用树脂。

操作步骤

从下列操作步骤中选择一种进行样品制备:

A.无需变性

使用无RNase水或1X MOPS缓冲液将RNA溶液体积调整至8 µl。加入2 µl凝胶上样液(货号G7654)

B.  仅甲酰胺变性

使用无RNase水将RNA溶液体积调整至8 µl。加入2 µl 10X MOPS缓冲液和9 µl去离子甲酰胺。

将样品混匀并在70 °C加热10分钟,然后在冰上冷却至少1分钟。

C.  甲醛变性

使用无RNase水将RNA溶液体积调整至6 µl。加入12 µl RNA上样缓冲液(含或不含溴化乙锭)。

将样品混匀并在70 °C加热10分钟,然后在冰上冷却至少1分钟。

D. 乙二醛变性

将2.5 ml DMSO与1.5 ml去离子乙二醛和1 ml 10X MOPS缓冲液混合均匀,制备乙二醛/DMSO混合液。将混合液快速分装至微量离心管中,并保存在–80 °C。每个分装管仅可解冻1次;请勿重复使用。

使用无RNase水将RNA溶液体积调整至9 µl。加入9 µl glyoxal/DMSO混合液。将样品混匀并在50 °C加热60分钟,然后在冰上冷却至少1分钟。

 

制备过程可在5分钟内完成。

1.从凝胶盒底部的粘合带上取下衬纸。

2.取下盖子。将凝胶留在凝胶盒中。

3.将凝胶盒直接安装到电泳槽中。将孔对齐,以便RNA样品沿直线电泳。

4.在电泳槽中倒入1X MOPS电泳缓冲液,使液面比凝胶盒上缘高出5mm。

5.RNA样品上样(每孔上样量少于15 μl)。

6.以3.5 V/cm电泳2小时。亦可降低电压并延长电泳时间。

7.从凝胶盒中取出凝胶,用于拍照/存档和/或脱色处理。

 

     
  • RNA Methodologies: A Laboratory Guide for Isolation and Characterization, R.E. Farrell Jr., Academic Press Inc., San Diego, CA, 1993 (Product No. Z35,035-4)
  • A Laboratory Guide to RNA: Isolation, Analysis and Synthesis, P. Krieg, Ed., Wiley-Liss, New York, NY, 1996 (Product No. Z37,382-6)
  • Short Protocols in Molecular Biology, 3rd ed., F.M. Ausubel, et al., John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, 1995 (Product No. Z36,436-3)
  • Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Vol. 1, 2, and 3, J. Sambrook, E.F. Fritsch and T. Maniatis, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (Product No. M3401)