Prestige Antigens™-封闭实验方案

抗原封闭实验方案

推荐根据下述的标准封闭方案使用Prestige抗原及相应的Prestige抗体。

 

IHC或ICC实验预吸附Prestige抗原

重新滴定抗体以确定用于封闭研究的最佳稀释比例。最佳滴度是抗体仍能显示预期染色的最高稀释度。

根据抗体(150,000 Da)以及Prestige抗原(15,000 Da).的浓度和分子量计算10倍和100倍摩尔过量所需的Prestige抗原。

按计算所得的量,将抗体和Prestige抗原在2ml管中混合,并用PBS将总体积调至30-50 μl。

在室温下孵育含有抗体/Prestige抗原的试管30分钟,或在4℃下轻轻振荡过夜。

使用没有Prestige抗原的一抗或不同Prestige抗原(与目标蛋白不反应)作为对照。

将含抗体/Prestige抗原的离心管以最大转速(15,000 rpm)离心15 min,将所有免疫复合物沉淀。

小心地将上清移到新管中,制备免疫染色工作液。由于抗体现已稀释4-12倍,因此必须相应调整抗体稀释液体积。

按照常规的IHC或ICC实验方案进行实验。

 

 

WB实验预吸附Prestige抗原

在3.5ml封闭缓冲液中,将1:250稀释一抗与相应Prestige抗原(100x摩尔过量)室温预孵育30 min。根据抗体(150,000 Da)和PrEST抗原(15,000 Da)的浓度和分子量计算100x摩尔过量所需的Prestige抗原。

使用不含Prestige抗原的一抗或与目标蛋白不反应的另一Prestige抗原作为免疫印迹实验的对照。

将孵育的抗体-Prestige抗原混合物加入到封闭的膜中,并在辊式混合器或摇床上室温孵育1小时。

按照常规的WB实验方案开展实验。

2017年十月修改

 

 

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