蛋白质测定 Warburg-Christian 方法


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1. 目标

通过Warburg-Christian(地址:Sigma-Aldrich, St. Louis, MO.)标准化测定蛋白质含量的程序。

2. 范围
本程序适用于所有需要用 Warburg-Christian方法测定蛋白质的产品。

3. 定义

净化水-去离子水,电阻率在25ºC下> 或 =18 MΩ•cm

4. 讨论

不适用

5. 职责

所有经过培训的分析服务实验室人员都有责任按照书面程序进行操作。

6. 安全

有关危险和合理的预防措施,请参阅材料安全数据表(MSDS)。

7. 流程

7.1   条件:
T = 25°C,A260 nm 和 A280 nm,光程 =1 cm

7.2   方法:
分光光度计测量

7.3   试剂:
蛋白样品溶液(样品

在合适的缓冲液或纯化水中配制含有约 0.3 mg 蛋白/ml 样品的溶液。

7.4   试验方法
在合适的比色杯中读取A260nm和A280nm样品和适当空白样品。A280nm必须大于A260nm,才能获得有效结果。NAD 或 NADP 的存在将影响蛋白质的 A260nm  和 A280nm,因此,必要时,必须在计算中进行校正。

8.  计算

mg 蛋白/ml= [(1.31 xA280)-(0.57 xA260)] x 稀释倍数
 

% 蛋白质 =

(1.31 xA280)-(0.57 xA260)

x 100

mg 固体/ml


 

*mg 蛋白/ml =

[(5 xA280)-A260] x 稀释倍数

4.635

* NAD 或 NADP 校正

9. 引用和附件

Warburg, O.和Christian W. (1941) Biochem.Z. 310, 384-421

10. 审批

 

  印刷体姓名 签名名称 标题 日期
编制: Nathan Vogel Nathan Vogel 创建: 2004/10/19
批准: Rodney Burbach Rodney Burbach 分析服务主管 2004/10/20
批准: Gene McNaughton Gene McNaughton 质量保证 2004/10/21