用胰蛋白酶从培养表面去除贴壁细胞


 描述

胰蛋白酶可用于从培养表面去除贴壁细胞。从培养基底物除去细胞的最常用方法是用胰蛋白酶或胰蛋白酶/EDTA溶液处理。1x工作溶液中的胰蛋白酶浓度可以为0.025-0.5%,这取决于胰蛋白酶的活性或效力、孵育时间、和细胞系。用浓度太高的胰蛋白酶孵育细胞太长时间,会破坏细胞膜并杀死细胞。如果不确定要使用多大浓度的胰蛋白酶,请从低浓度开始。


 注意事项

有关危险和安全处理方法的信息,请参阅安全数据表。


 需要的试剂和设备

汉克平衡盐溶液,改良型(货号:H9394
黄豆胰蛋白酶抑制剂(货号:T9008


 制备说明

如果胰蛋白酶是从浓缩溶液进行溶解或稀释,重要的是使用不含Ca2+或Mg2+的缓冲盐溶液,例如汉克平衡盐溶液,改良型(货号:H9394)。将胰蛋白酶溶液的pH调节至7.4-7.6。


 步骤

  1. 从培养容器中吸除培养基,用不含Ca2+和Mg2+的盐溶液洗涤细胞单层,以除去所有痕量的血清。吸除盐溶液。
  2. 将足够的胰蛋白酶或胰蛋白酶/EDTA溶液分配到培养容器中,完全覆盖细胞单层,然后置于37℃培养箱中约2分钟。
  3. 吸除胰蛋白酶或胰蛋白酶/EDTA溶液,并将封闭的培养容器放回培养箱。孵育细胞层,直至细胞从表面脱离。可以用倒置显微镜观察进展情况。
    说明:从培养表面除去细胞所需的时间取决于细胞类型、种群密度、生长培养基中的血清浓度、胰蛋白酶的效力、以及自上次传代培养以来的时间。胰蛋白酶会导致细胞损伤,因此暴露时间应尽量短。
  4. 当胰蛋白酶消化过程完成时,细胞将处于悬浮状态并呈圆形。
  5. 建议尽快将血清或含有血清的培养基加入细胞悬液中,以抑制可能损害细胞的胰蛋白酶进一步活动。黄豆胰蛋白酶抑制剂(货号:T9008)也可以等摩尔浓度加入,以抑制所存在的胰蛋白酶。当在无血清条件下培养时,使用黄豆胰蛋白酶抑制剂。
  6. 用移液管轻轻吸排细胞悬液,以使团块散开,将细胞重悬。如果需要,可以进行进一步稀释,用于细胞计数和/或传代培养。


 材料