酵母生长实验方案

在中可以找到更多的实验方案和选择指南 分子生物学指南


 引言

酵母生长迅速且细胞分散,因此被认为是真核研究的模型系统。此外,酵母细胞的复制接种和突变体分离相对容易,并且它们具有明确定义的遗传系统。最重要的是,酵母具有高度通用的DNA转化系统,可有效地用于蛋白质生产。


 酵母培养

在一般实验应用中,酵母通常在30℃下在YPD或合成培养基中生长。Sigma-Aldrich提供以下生长培养基和补剂用于酵母培养:

表1:酵母培养基

 

货号 名称
Y1375 YPD肉汤
Y1500 YPD琼脂
Y0626 无氨基酸的酵母氮基
Y1250 含氨基酸的酵母氮基

 

表2:合成的营养缺陷型培养基补剂(配用不含氨基酸的酵母氮基,货号:Y0626 )。

 

货号 名称  
Y1501 尿嘧啶  
Y1751 组氨酸  
Y1896 赖氨酸  
Y1376 亮氨酸  
Y1876 色氨酸              
Y0750 亮氨酸和色氨酸  
Y1771 尿嘧啶,亮氨酸和色氨酸  
Y2146 组氨酸,亮氨酸和色氨酸  
Y2021 组氨酸,亮氨酸,色氨酸和腺嘌呤  
Y2001 组氨酸,亮氨酸,色氨酸和尿嘧啶  

 

表3:其他用于酵母培养的补剂

 

货号 名称
T2559
EZMix™ 胰蛋白胨
G5516 丙三醇

有关酵母培养基的更多详细信息,请参阅我们的文章《酵母培养基简介》
 


 酵母生长实验方案

下面给出的实验方案可用于在液体和固体培养基中生长和维持酵母。

YPD肉汤中的酵母生长

     

  1. 将50 g产品(货号:Y1375 )悬浮于1L蒸馏水中。.
  2. 在121℃下高压灭菌15分钟。
  3. 在装有制备液体培养基的无去垢剂的试管 / 烧瓶中接种酵母培养物(来自酵母肉汤 / 培养板),参见步骤1和2(培养基不应超过培养管容量的三分之一或烧瓶总容量的五分之一)。
  4. 略微涡旋内容物以分散细胞。
  5. 在振动培养箱中以300 rpm(对烧瓶)或350 rpm(对培养管)孵育培养物。
YPD琼脂中的酵母生长
  1. 将65 g产品(货号:Y1500)悬浮于1L蒸馏水中。
  2. 边搅拌边加热至沸腾以完全溶解所有成分。.
  3. 在121℃下高压灭菌15分钟。
  4. 将约25-30 mL琼脂培养基倒入无菌培养板中,置于层流室中待其凝固。
  5. 在琼脂板上划线(来自于YPD板的酵母)/ 涂布(来自于肉汤的酵母)细胞,并在30℃下孵育。

 注意:在大约24小时后可以观察到单个酵母菌落,但在其可用于复制接种之前,需要孵育48小时以上。在使用合成的营 养缺陷型培养基补剂的情况下,酵母培养物的生长速率约慢50%。


 酵母菌株保存与复苏

使用上述方法培养的酵母细胞可以在甘油中在-70℃下冷冻保存3年以上,或在营养丰富的斜面培养基中在4℃下保存6个月至一年。 含有酵母细胞的YPD板用Parafilm® 密封后也可以在4°C下保存2-3个月。保存和复苏酵母细胞的实验方案如下:

酵母细胞保存

  1. 配制30%(w / v)无菌甘油溶液(货号:G5516)
  2. 将1.0 mL甘油溶液加入到4 mL有螺旋盖的无菌小管中。
  3. 取1.0 mL早期为静止期 / 后期为对数增殖期的酵母肉汤 
    或者从刚培养好的板上刮下大量接种物。
  4. 重悬于1 mL 30%无菌甘油溶液中。
  5. 混合,在干冰上冷冻,并保存于-70℃下。 N说明:酵母细胞在8%(v / v)二甲基亚砜(DMSO,货号:D8418)中的储存方法类似。
 酵母菌株复苏
  1. 用无菌牙签或细菌接种针刮擦冷冻的原液。
  2. 将酵母细胞划在合适的培养板上,并在30℃下孵育。

        注意:避免解冻原液。

 


 材料

     


 参考文献

  1. Sherman, F., Getting started with yeast, Methods Enzymol., 350, 3-41 (2002).
  2. Methods in Molecular Biology, Vol. 177, Two-Hybrid Systems: Methods and Protocols, May 2001, Springer Protocols
  3. Current Protocols in Molecular Biology 13.2.1-13.2.12, April 2008, Wiley Interscience
  4. Schiestl and Gietz (1989) Curr. Genetics 16:339-346; Gietz, et al (1995) Yeast 11:355-360
  5. Li, B., and Fields, S., Identification of mutations in p53 that affect its binding to SV40 large T antigen by using the yeast two-hybrid system. The FASEB journal, 7(10), 957-963 (1993).

EZMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC.

Parafilm is a registered trademark of Bemis Company, Inc.