ADME/Tox & DMPK in vitro systems

組み換え代謝酵素
基質、誘導剤、阻害剤

組み換え酵素(シトクロムP450およびGST)

CypExpress™
ヒトシトクロムP450触媒システム

CypExpressは、単一の組換ヒトシトクロムP450(CYP)とP450オキシドレダクターゼが酸化防止剤とともに半透過性シェル内に封入された酵素製品です。

特長

  • すぐに使用できる安定した乾燥粉末
  • 数時間から一晩にわたり活性を維持
  • 複数の反応サイクル
  • 明瞭なHPLCピークと高収率代謝産物
  • 低速遠心分離だけで簡単に分離可能
  • 現行の主要アッセイからの大幅なコスト削減
  • 代謝スクリーニングに
    (肝臓スライスおよび/またはミクロソームの代替に)
  • P450表現型決定に
  • 代謝産物の同定および構造的特徴付けに
  • 主要代謝物の合成に

Figure 1.
従来法との比較 1

高い収率で代謝産物が得られる。

システム アイソフォーム G6PDH 反応温度 反応バッファー 反応時間 コスト 副産物 使いやすさ コストあたりの
代謝産物収量
CypExpress × 20~37℃ リン酸バッファー、
トリスバッファーなど
~数日 ○○○
ミクロソーム 37℃ リン酸バッファー 30分 ※※ ○○
バクテリア 37℃ リン酸バッファー 30分 ※※
バキュロウィルス 37℃ リン酸バッファー 30分 ※※※ ×

Table 1.
従来法との比較 2

G6PDH添加の必要がなく、複数のバッファーに対応。試験化合物を基質と混合しインキュベーションした後、遠心分離(またはろ過)すれば、CypExpressを再利用可能。

Figure 2.
CypExpress代謝産物はHPLCでより明確に同定が可能

従来法と比べてクリアなベースラインが観察できる。

CypExpress サイクル数 基質 反応 代謝産物 収量
2C9 1 × 1.5 hr ジクロフェナク 9.25 mg in 400 mL 4'-ヒドロキシジクロフェナク 53.6 mg (90.5%)
2D6 2 × 3 hr デキストロメトルファン 27.0 mg in 200 mL デキストロルファン 7.5 mg (27.8%)
3A4 2 × 3 hr テストステロン 14.4 mg in 200 mL 6β-テストステロン 7.01 mg (48.7%)

Table 2.
代謝産物合成のスケールアップが可能

試験化合物(基質)の代謝産物へ高効率で変換される。必要に応じて1日で複数回の反応サイクルを実施可能。

基質 (200 μM) CypExpress™ 代謝産物 plate 代謝産物μM±SD
ジクロフェナク 2C9 4'-ヒドロキシジクロフェナク 24-well 80.55 ± 8.32
96-well 184.89 ± 5.03
(S)-メフェニトイン 2C19 S-4'-ヒドロキシメフェニトイン 24-well 28.73 ± 4.25
96-well 18.07 ± 1.51
デキストロメトルファン 2D6 デキストロルファン 24-well 92.15 ± 0.95
96-well 58.17 ± 3.84
テストステロン 3A4 6-β-ヒドロキシテストステロン 24-well 52.37 ± 0.76
96-well 46.92 ± 7.70

Table 3.
CypExpressマイクロタイタープレートと組み合わせた際の典型的な代謝産物の収率

製品情報

製品名 発現宿主 カタログ番号
CypExpress™ 1A1 Cytochrome P450 human Pichia pastoris  MTOXCE1A1
CypExpress™ 1A2 Cytochrome P450 human Pichia pastoris  MTOXCE1A2
CypExpress™ 2B6 Cytochrome P450 human Pichia pastoris  MTOXCE2B6
CypExpress™ 2C9 Cytochrome P450 human Pichia pastoris  MTOXCE2C9
CypExpress™ 2C19 Cytochrome P450 human Pichia pastoris  MTOXCE2C19
CypExpress™ 2D6 Cytochrome P450 human  Pichia pastoris  MTOXCE2D6
CypExpress™ 3A4 Cytochrome P450 human Pichia pastoris  MTOXCE3A4
CypExpress™ 2E1 Cytochrome P450 human Pichia pastoris  MTOXCE2E1
CypExpress™ Aromatase Pichia pastoris  MTOXCE19A1
CypExpress™ Control yeast MTOXCENULL

グルタチオンS-トランスフェラーゼリコンビナント酵素およびELISAキット

シグマ アルドリッチはグルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)組換酵素を多く取り揃えております。GST組み換え酵素およびGST ELISAキットのリストについては、下記製品一覧をご覧ください。

組み換えGST

製品名 カタログ番号
GST S1-1, Recombinant Human GS05-100UG
GST T1-1, Recombinant Rat GS38-100UG
GST T2-2, Recombinant Rat GS39-100UG
GST T2-2, Recombinant Human GS52-100UG
GST A5-5, Recombinant Human GS58-100UG
GST M5-5, Recombinant Human GS59-100UG
GST A1-1, Recombinant Human  GS60-100UG
GST A2-2, Recombinant Human GS61-100UG
GST A3-3, Recombinant Human GS63-100UG
GST A4-4, Recombinant Human GS64-100UG
製品名 カタログ番号
GST M1-1, Recombinant Human GS65-100UG
GST M2-2, Recombinant Human GS66-100UG
GST P1-1, Recombinant Human GS70-100UG
GST K1-1, Recombinant Human GS71-100UG
GST M3-3, Recombinant Human GS73-100UG
GST M4-4, Recombinant Human GS74-100UG
GST O1-1, Recombinant Human GS75-100UG
GST O2-2, Recombinant Human GS76-100UG
GST A1-1, Recombinant Bovine GS85-100UG
GST T1-1, Recombinant Human GS90-100UG

ELISAキット

製品名 容量 カタログ番号
Human GST alpha Assay Kit 96 well plate GS41-1KT
Human GST Pi Assay Kit 96 well plate GS46-1KT

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基質、誘導剤、阻害剤

シトクロムP450酵素活性阻害剤

in vitro選択的阻害剤

Enzyme inhibitors カタログ番号
CYP1A2 α-Naphthoflavone N5757
Furafylline  F124
CYP2B6 Sertraline  S6319
Thiotepa T6069
Ticlopidine T6654
Phencyclidine -
CYP2C8 Montelukast SML0101
Quercetin Q4951
Phenelzine P6777
CYP2C9 Sulfaphenazole S0758
Tienilic acid SML0505
CYP2C19 S-(+)-N-3-benzyl-nirvanol B8686
Nootkatone 74437
Ticlopidine T6654
CYP2D6 Quinidine Q3625
Paroxetine P9623
CYP3A4/5 Itraconazole I6657 
Ketoconazole K1003
Azamulin SML0485
Verapamil V4629
Troleandomycin -

臨床指標阻害剤(臨床薬物相互作用試験における評価用)

Enzyme Strong
index inhibitors
カタログ番号 Moderate
index inhibitors
カタログ番号
CYP1A2 Fluvoxamine F2802 -  
CYP2B6 -   -  
CYP2C8 Clopidogrel SML0004 -  
Gemfibrozil G9518    
CYP2C9 -   Fluconazole F8929
CYP2C19 Fluvoxamine F2802 -  
CYP2D6  Fluoxetine F132 Mirabegron  
Paroxetine P9623    
CYP3A clarithromycin C9742 Erythromycin E6376
itraconazole I6657 fluconazole F8929
    verapamil V4629

臨床的阻害剤(併用薬物相互作用臨床試験および/または薬物ラベリング用)

Enzyme Strong
inhibitors
カタログ番号 Moderate
inhibitors
カタログ番号 Weak
inhibitors
カタログ番号
CYP1A2 Ciprofloxacin 17850 Methoxsalen M3501 Acyclovir A4669
Enoxacin 94426 Mexiletine  M2727 Allopurinol A8003
Fluvoxamine F2802 Oral contraceptives - Cimetidine C4522
Zafirlukast Z4152     Piperine P49007
        Zileuton Z4277
        Peginterferon alpha-2a -
CYP2B6 -   -   Clopidogrel SML0004
        Clopidogrel C0614
        Tenofovir SML1795
        Ticlopidine T6654
        Voriconazole PZ0005
CYP2C8 Clopidogrel SML0004 Teriflunomide SML0936 Trimethoprim T7883
Clopidogrel C0614 Deferasirox - Telithromycin -
Gemfibrozil G9518        
CYP2C9 -   Amiodarone A8423 Diosmin D3525, 61386
    Felbamate F0778 Disulfiram 86720
    Fluconazole F8929 Fluvastatin SML0038
    Miconazole M3512 Fluvoxamine F2802
    Piperine P49007 Voriconazole PZ0005
CYP2C19 Fluconazole F8929 -   Omeprazole O104
Fluoxetine F132     voriconazole PZ0005
Fluvoxamine F2802        
Ticlopidine T6654        
CYP2D6 Bupropion B102 Cimetidine C4522 Abiraterone SML1527
Fluoxetine F132 Duloxetine SML0474 Amiodarone A8423
Paroxetine P9623 Fluvoxamine F2802 Celecoxib PZ0008
Quinidine Q3625 Cinacalcet - Cimetidine C4522
Terbinafine T8826 Mirabegron - Clobazam C8414
        Desvenlafaxine D2069
        Escitalopram E4786
        Labetalol L1011
        Ritonavir SML0491
        Sertraline S6319
        Cobicistat -
        Lorcaserin -
        Vemurafenib -
CYP3A Boceprevir SML1473 Cimetidine C4522 Chlorzoxazone C4397
Indinavir and Ritonavir SML0189 and SML0491 Ciprofloxacin 17850 Cilostazol C0737
Itraconazole I6657 Clotrimazole C6019 Istradefylline SML0422
Ketoconazole K1003 Crizotinib PZ0191 Lomitapide SML1385
Lopinavir and Ritonavir SML1222 and SML0491 Crizotinib PZ0240 Ranitidine R101
Posaconazole 32103 Cyclosporine A C3662, 30024 Ranolazine R6152
Ritonavir SML0491 Dronedarone D9696 Tacrolimus F4679
Saquinavir and Ritonavir S8451 and SML0491 Erythromycin E5389, E6376, E0774 Ticagrelor CDS023238
Voriconazole PZ0005 Fluconazole F8929 Fosaprepitant -
Cobicistat - Fluvoxamine F2802 Ivacaftor -
Conivaptan - Imatinib SML1027    
Danoprevir and Ritonavir - Tofisopam T8200    
Elvitegravir and Ritonavir - Verapamil V4629, V105    
Grapefruit juice - Aprepitant -    
Paritaprevir and Ritonavir -        
Tipranavir  and Ritonavir -        
Troleandomycin -        
Clarithromycin C9742        
Diltiazem D2521        
Nefazodone N5536        
Nelfinavir PZ0013        
Idelalisib -        

シトクロムP450酵素活性誘導剤

in vitro誘導剤

Enzyme inducers カタログ番号
CYP1A2 Omeprazole O104
Lansoprazole L8533
CYP2B6 Phenobarbital P1636
CYP2C8 Rifampicin R3501, R7382
CYP2C9 Rifampicin R3501, R7382
CYP2C19 Rifampicin R3501, R7382
CYP3A4/5 Rifampicin R3501, R7382

臨床指標誘導剤(臨床薬物相互作用試験における評価用)

Enzyme Strong
inducers
カタログ番号 Moderate
inducers
カタログ番号
CYP1A2 -   -  
CYP2B6 -   Rifampicin R3501, R7382
CYP2C8 -   Rifampicin R3501, R7382
CYP2C9 -   Rifampicin R3501, R7382
CYP2C19 Rifampicin R3501, R7382 -  
CYP3A phenytoin D4007 -  
Rifampicin R3501, R7382    

臨床誘導剤(併用薬物相互作用臨床試験および/または薬物ラベリング用)

Enzyme Strong
inducers
カタログ番号 Moderate
inducers
カタログ番号 Weak
inducers
カタログ番号
CYP1A2 -   Phenytoin D4007 -  
    Rifampicin R3501, R7382    
    Ritonavir SML0491    
    Teriflunomide SML0936    
    Smoking -    
CYP2B6 Carbamazepine C4024 Efavirenz SML0536 Nevirapine SML0097
    Rifampicin R3501, R7382    
    Ritonavir SML0491    
CYP2C8 -   Rifampicin R3501, R7382 -  
CYP2C9 -   Carbamazepine C4024 -  
    Enzalutamide SML1886    
    Rifampicin R3501, R7382    
    Ritonavir SML0491    
    Aprepitant -    
CYP2C19 Rifampicin R3501, R7382 Efavirenz SML0536 -  
Ritonavir SML0491 Enzalutamide SML1886    
    Phenytoin D4007    
CYP3A Carbamazepine C4024 Bosentan SML1265 Armodafinil SML0039
Enzalutamide SML1886 Efavirenz SML0536 Rufinamide R8404
Mitotane SML1885 Modafinil M6940    
Phenytoin D4007 Etravirine -    
Rifampicin R3501, R7382        
St. John’s wort 0529500        

シトクロムP450酵素活性の基質

臨床指標基質(臨床薬物相互作用試験における評価用)

Enzyme Sensitive index substrates unless otherwise noted カタログ番号
CYP1A2 Caffeine C0750
Tizanidine T6950
CYP2B6 - -
CYP2C8 Repaglinide R9028
CYP2C9 S-warfarin UC214
Tolbutamide -
CYP2C19 Lansoprazole L8533
Omeprazole O104
CYP2D6 Desipramine D3900
Dextromethorphan D2531
Nebivolol N1915
CYP3A Midazolam M2419
Triazolam T9772

臨床基質(併用薬物相互作用臨床試験および/または薬物ラベリング用)

Enzyme Sensitive
substrates
カタログ番号 Moderate
sensitive substrates
カタログ番号
CYP1A2 Alosetron SML0346 Clozapine C6305
Caffeine C0750 Pirfenidone P2116
Duloxetine SML0474 Ramosetron SML0674
Melatonin M5250    
Theophylline T1633    
Tizanidine T6950    
CYP2B6 Bupropion B102 Efavirenz SML0536
CYP2C8 Repaglinide R9028 Montelukast SML0101
    Pioglitazone E6910
    Rosiglitazone R2408
CYP2C9 Celecoxib PZ0008 Glimepiride G2295
    Phenytoin D4007
    S-warfarin UC214
    Tolbutamide -
CYP2C19 S-mephenytoin UC175 Diazepam D0899
Omeprazole O104 Lansoprazole L8533
    Rabeprazole SML0476
    Voriconazole PZ0005
CYP2D6 Atomoxetine T7947 Amitriptyline A8404
Desipramine D3900 Encainide E9156
Dextromethorphan D2531 Imipramine I7379
Nebivolol N1915 Metoprolol M5391
Nortriptyline N7261 Propafenone P4670
Perphenazine P6402 Propranolol P0884
Tolterodine PZ0009 Tramadol 42965
Venlafaxine V7264 Trimipramine T3146
Eliglustat -    
CYP3A Buspirone B7148 Alprazolam A8800
Darifenacin SML1102 Atorvastatin PZ0001
Darunavir SML0937 Colchicine C9754
Ebastine E9531 Pimozide P1793
Lomitapide SML1385 Tadalafil SML1877
Lovastatin M2147 Aprepitant -
Midazolam M2419 Eliglustat -
Nisoldipine N0165 Rilpivirine -
Saquinavir S8451 Rivaroxaban -
Simvastatin S6196    
Sirolimus R0395    
Tacrolimus F4679    
Triazolam T9772    
Alfentanil -    
Avanafil -    
Conivaptan -    
Everolimus -    
Ibrutinib -    
Naloxegol -    
Tipranavir -    
Vardenafil -    
Budesonide B7777    
Dasatinib CDS023389    
Dronedarone D9696    
Eletriptan PZ0011    
Eplerenone E6657    
Felodipine F9677    
Indinavir SML0189    
Maraviroc PZ0002    
Quetiapine Q3638    
Sildenafil PZ0003    
Ticagrelor CDS023238    
Tolvaptan T7455    
Lurasidone -    

薬物トランスポーターに対する基質

in vitro基質

Transporter Gene Substrate カタログ番号
P-gp ABCB1 Digoxin D6003
Fexofenadine F9427
Loperamide L4762
Quinidine Q3625
Vinblastine V1377
Talinolol -
BCRP ABCG2 Coumestrol 27883
Daidzein D7802
Dantrolene D9175
Estrone-3-sulfate E0251, E9145
Genistein G6649, G6776
Prazosin P7791
Sulfasalazine S0883
2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine (PhIP) -
OATP1B1,
OATP1B3
SLCO1B1,
SLCO1B3
Cholecystokinin octapeptide(CCK-8) C2901
Estradiol-17β-glucuronide E1127
Estrone-3-sulfate E0251, E9145
Pravastatin P4498
Telmisartan T8949
Rosuvastatin SML1264
Pitavastatin -
OAT1 SLC22A6 Adefovir SML0240
p-aminohippurate A1422
Cidofovir C5874
Tenofovir SML1795
OAT3 SLC22A8 Benzylpenicillin P3032, P8721
Estrone-3-sulfate E0251, E9145
Methotrexate A6770
Pravastatin P4498
MATE1,
MATE-2K,
OCT2
SLC47A1,
SLC47A2,
SLC22A2
Metformin D150959, 317240
1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP+) D048
Tetraethylammonium (TEA) T2265

in vivo基質

Transporter Gene Substrate カタログ番号
P-gp ABCB1 Digoxin D6003
Fexofenadine F9427
Dabigatran -
BCRP ABCG2 Rosuvastatin SML1264
Sulfasalazine S0883
OATP1B1
OATP1B3
SLCO1B1,
SLCO1B3
Atorvastatin PZ0001
Bosentan SML1265
Cerivastatin SML0005
Docetaxel 01885
Fexofenadine F9427
Glyburide G2539
Nateglinide N3538
Paclitaxel T1912, T7191, T7402
Pravastatin P4498
Repaglinide R9028
Rosuvastatin SML1264
Simvastatin acid 07363
Asunaprevir -
Danoprevir -
Pitavastatin -
OAT1
OAT3
SLC22A6,
SLC22A8
Adefovir SML0240
Cefaclor C6895
Ceftizoxime A3612
Famotidine F6889
Furosemide F4381
Ganciclovir G2536
Methotrexate A6770, M8407
Oseltamivir carboxylate SML1606
Penicillin G 13752
MATE1,
MATE-2K, OCT2
SLC47A1, SLC47A2, SLC22A2 Dofetilide PZ0016
Metformin D150959, 317240

薬物トランスポーター阻害剤

in vitro阻害剤

Transporter Gene Inhibitor カタログ番号
P-gp ABCB1 Cyclosporine C3662
Elacridar SML0486
Ketoconazole K1003
Quinidine Q3625
Reserpine R0875
Ritonavir SML0491
Tacrolimus PHR1809
Valspodar  SML0572
Verapamil V4629
Zosuquidar  SML1044
BCRP ABCG2 Elacridar  SML0486
Fumitremorgin C F9054
Ko143 K2144
Novobiocin N1628
Sulfasalazine S0883
Ko134 -
OATP1B1,
OATP1B3
SLCO1B1,
SLCO1B3
Cyclosporine C3662
Estradiol-17β-glucuronide E1127
Estrone-3-sulfate E0251, E9145
Rifampicin R3501, R7382 
Rifamycin SV R8626
OAT1,
OAT3
SLC22A6,
SLC22A8
Benzylpenicillin P3032
Probenecid P8761
MATE1,
MATE-2K
SLC47A1,
SLC47A2
Cimetidine C4522
Pyrimethamine 46706
OCT2 SLC22A2 Cimetidine C4522

in vivo阻害剤

Transporter Gene Inhibitor カタログ番号
P-gp ABCB1 Amiodarone A8423 
Carvedilol C3993
Clarithromycin A3487, C9742
Dronedarone D9696
Itraconazole I6657
Lapatinib CDS022971
Lopinavir and Ritonavir SML1222 and SML0491
Propafenone P4670
Quinidine Q3625
Ranolazine R6152
Saquinavir and Ritonavir S8451 and SML0491
Telaprevir SML1473
Verapamil V4629
Tipranavir and Ritonavir -
BCRP ABCG2 Curcumin C7727
Cyclosporine A C1832, C3662
Eltrombopag -
OATP1B1,
OATP1B3
SLCO1B1,
SLCO1B3
Atazanavir and Ritonavir SML1796 and SML0491 
Clarithromycin A3487, C9742
Cyclosporine A C1832, C3662
Erythromycin E5389
Gemfibrozil G9518
Lopinavir and Ritonavir SML1222 and SML0491
Rifampin R3501, R7382 
Simeprevir -
OAT1,
OAT3
SLC22A6,
SLC22A8
p-Aminohippuric acid (PAH) A1422
Probenecid P8761
Teriflunomide SML0936
MATE1,
MATE2-K
SLC47A1,
SLC47A2
Cimetidine C4522
Ranolazine R6152
Trimethoprim T7883
Dolutegravir -
Isavuconazole -
Vandetanib -

U.S. FOOD & DRUG ADMINISTRATION
Drug Development and Drug Interactions: Table of Substrates, Inhibitors and Inducer

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