Bln I (AVR II)

Bln I reconoce la secuencia C↓CTAGG y genera fragmentos con extremos 5′-cohesivos.

Extremos compatibles
Los extremos bln I son compatibles con los extremos generados por Nhe I, Spe I y XBA I.

Isosquizómeros
El bln i es un isosquizómero de Avr II
Nota: Se ha comunicado el mapa completo de restricción Avr II sitio 13 del genoma de E.coli.

Sensibilidad a la metilación
No se sabe que la enzima se vea afectada por la metilación.

Sitios de reconocimiento: CCTAGG
CCTAGG
Sitio de restricción: C↓CTAGG
C↓CTAGG
Inactivación por calor: No inactivación de Bln I después de la incubación a 65 °C durante 15 minutos.

Número de sitios de escisión en diferentes ADN

• λ: 2
• φX174: 0
• Ad2: 2
• M13mp7: 0
• M13mp18:0
• pBR322: 0
• pBR328: 0
• pUC18: 0
• SV40: 2

No conservar por debajo de −25°C.

Ausencia de actividades endonucleasas inespecíficas
Se incuba 1 μg λde ADN durante 16 horas en 50 μl de tampón Sure/Cut H con un exceso de Bln I. El número de unidades enzimáticas que no cambian el patrón enzimático específico se indica en el certificado de análisis.

Ausencia de actividad exonucleasa
Aproximadamente 5 μg de ADN de timo de ternero marcado con [³H] se incuban con 3 μl de Bln I durante 4 horas a +37°C en un volumen total de 100 μl de Tris-HCl 50 mM, MgCl₂ 10 mM, ditioeritritol 1 mM, pH aproximado de 7,5. En estas condiciones, no se detecta liberación de radiactividad, como se indica en el certificado de análisis.

Ensayo típico de ligadura y recorte
Fragmentos de bln I obtenidos por digestión completa de 1 μg λ × EcoR I ADN ligado durante 16 horas a +4°C con 1 U de ADN Ligasa T4 en 10 μl de tampón que contiene Tris-HCl 66 mM, MgCl₂ 5mM, ditiotreitol 5 mM, ATP 1 mM, pH 7,5 (a +20°C). Los porcentajes de producto que pueden ligarse y luego volverse a cortar con Bln I y EcoR I (que producen el patrón típico de los fragmentos λ × EcoR I × Bln I) se indican bajo "Lig" y "Rec" en el certificado de análisis.

PFGE analizado
Bln I ha sido probado en electroforesis en gel de campo pulsado (en cromosomas bacterianos). Para la escisión del ADN genómico (E.coli C 600) incluido en agarosa para el análisis mediante PFGE, se recomienda utilizar 10 U de enzima/μg de ADN y 4 horas de incubación.

Sistema de tampón Sure/Cut
El tampón en negrita se recomienda para una actividad óptima

• A: 25 - 50 %
• B: 50 - 75%
• H: 100 %
• L: 0-10 %
• M: 25 - 50%

Actividad en tampón para PCR: No se ha probado

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

Una unidad es la actividad enzimática que rompe por completo fragmentos de ADN 1 μg λ x ECOR I en una hora a +37 °C en un volumen total de 25 μl (1x) de tampón SuRE/Cut Buffer H.