Reactivos y sustratos de inmunodetección

Reactivos de bloqueo

El bloqueo de los sitios de membrana no unidos evita la unión inespecífica de anticuerpos que puede dar lugar a un fondo elevado. Los bloqueadores tradicionales a base de leche, gelatina y otras proteínas son eficaces para muchas aplicaciones de blotting pero pueden reducir la sensibilidad o la detección enmascarando la señal o interfiriendo en la detección de dianas proteicas específicas. Immobilon® Block Noise Cancelling Reagents incluyen tampones sin proteínas, listos para usar y optimizados para reducir los niveles de fondo cuando se utiliza quimioluminiscencia, fluorescencia o detección de fosfoproteínas.

Immobilon® Block Noise Cancelling Reagents.

Estreptavidina y conjugados de anticuerpos secundarios

Los métodos modernos de inmunodetección se basan en la detección enzimática.Los métodos modernos de inmunodetección se basan en la detección ligada a enzimas utilizando estreptavidina o anticuerpos secundarios unidos covalentemente a enzimas como la peroxidasa de rábano picante (HRP) o la fosfatasa alcalina (AP). La enzima conjugada cataliza la degradación de sustratos específicos, dando lugar a la generación de la señal. También ofrecemos una amplia selección de sustratos de HRP y AP para la detección quimioluminiscente, cromogénica y quimifluorescente en Western blotting.

SUBSTRATOS QUIMIOLUMINiscENTES PARA WESTERN BLOTTING

Immobilon^® HRP para detección quimioluminiscente proporcionan una mayor sensibilidad para blots más cuantitativos, reduciendo costes al permitirle disminuir la concentración de anticuerpo utilizada para la detección. Elija entre una cartera de sustratos Immobilon® con sensibilidades variables en cómodos formatos listos para usar o de dos componentes para optimizar la detección para su aplicación de Western blotting.

• Sustratos quimioluminiscentes Immobilon® Classico, Crescendo y Fortecomprenden una familia de reactivos premezclados y listos para usar para la detección basada en peroxidasa que se ofrecen en una gama de sensibilidades para proporcionar relaciones señal/fondo óptimas en un espectro de concentraciones de proteínas diana.Límites de detección:
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg de proteína diana
  • Immobilon^® Crescendo: ~ 1-3 pg proteína diana
  • Immobilon^® Forte: ~ 400 fg proteína diana
     
• Immobilon® Western HRP, Immobilon^® ECL Ultra, and Immobilon^® UltraPlus Western substrates deliver exceptional sensitivity and long signal life in standard 2-component formats. Estas formulaciones permiten el uso de soluciones de anticuerpos primarios más diluidas para la detección de inmunoblot. Límites de detección:
  • Sustrato HRP Western Immobilon^®: ~ 400 fg de proteína diana
  • Sustrato ECL Ultra de Immobilon®: rango bajo de femtogramos
  • Sustrato HRP de Western Blot de Immobilon® ECL UltraPlus: gama baja de femtogramos

Sensibilidad relativa de los sustratos HRP quimioluminiscentes Immobilon^®

Los reactivos de detección Cytiva™ Amersham™ ECL utilizan detección mejorada basada en luminol HRP con diferentes formulaciones disponibles para cubrir diferentes necesidades de aplicación de Western blotting.

• Los reactivos de detección de Western blotting Cytiva Amersham™ ECL se recomiendan para aplicaciones de Western blotting de confirmación.
• El reactivo de detección de Western blot Cytiva Amersham™ ECL Prime permite la detección de proteínas tanto de alta como de baja abundancia en el mismo blot.
• Los reactivos de detección de Western blot Cytiva Amersham™ ECL Select ofrecen una alta sensibilidad incluso cuando se utilizan anticuerpos primarios y secundarios diluidos.
• El reactivo de detección por Western blot Cytiva Amersham™ ECL Start se ha desarrollado para la detección quimioluminiscente de proteínas de media y alta expresión.

SUSTRATOS CROMOGÉNICOS PARA WESTERN BLOTTING

La detección cromogénica utiliza una enzima conjugada con peroxidasa (por ejemplo, HRP o fosfatasa alcalina (AP)) para catalizar la reacción que da lugar a la deposición de un precipitado coloreado insoluble para la detección, HRP) o enzima conjugada con fosfatasa alcalina (AP) para catalizar una reacción que da lugar a la deposición de un precipitado coloreado insoluble para la detección. Nuestros sustratos cromogénicos para Western blotting están disponibles en forma de solución, polvo y comprimidos para proporcionar opciones flexibles de almacenamiento y uso.

• SIGMAFAST™ DAB Tablets (sustrato cromogénico HRP).se componen de un sustrato precipitante colorimétrico que produce un color marrón al reaccionar con la peroxidasa de rábano picante y puede disolverse en agua para preparar una solución tamponada lista para usar para la detección de blotting.
• BCIP/NBT (azul/morado) y BCIP/TNBT (azul/marrón) Single Reagent (sustratos AP cromogénicos) son sustratos colorimétricos altamente sensibles para la fosfatasa alcalina.
• TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate (sustrato cromogénico HRP) es un sustrato colorimétrico de un solo componente que produce un producto azul oscuro.

• Reactivo único (sustratos cromogénicos AP).

Potenciadores de señal

• Immobilon®. Potenciador de señal está diseñado para su uso en aplicaciones de Western blotting cuando se observa una baja intensidad de señal. La potenciación de la reacción anticuerpo-antígeno puede producir un aumento de 2 a 10 veces en la intensidad de la señal. Immobilon^® Signal Enhancer es compatible con membranas de PVDF y nitrocelulosa y puede utilizarse con métodos de detección cromogénicos, quimioluminiscentes y fluorescentes.
• SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer Kit está diseñado para mejorar la señal de diana quimioluminiscente o colorimétrica en membranas de nitrocelulosa o PVDF

Reactivos y kits para stripping y reprobing

Los reactivos para stripping y reprobing están especialmente formulados para eliminar rápida y eficazmente los anticuerpos de los Western blots sin afectar significativamente a las proteínas inmovilizadas.

• ReBlot™ Plus reagents efficiently striped probed blots of bound antibodies. Los reactivos ReBlot™ Plus están disponibles en formulaciones suaves y fuertes.