DNALIG-RO

T4-DNA-Ligase

solution, from Escherichia coli(NM 989), suitable for activity assay

• Synonym(e): DNA-Ligase, T4
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• Specific activity: ~3000 units/mg protein
• Biological source: Escherichia coli (NM 989)
• Recombinant: expressed in E. coli

Eigenschaften

• biological source: Escherichia coli (NM 989)
• recombinant: expressed in E. coli
• description: recombinant form of the enzyme from T4 phage
• form: solution
• specific activity: ~3000 units/mg protein
• packaging: pkg of 100 U (10481220001 [1 U/μl]), pkg of 500 U (10716359001 [1 U/μl]), pkg of 500 U (10799009001 [5 U/μl])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 4-22 °C optimum reaction temp.
• technique(s): activity assay: suitable
• optimum pH: 7.2-7.8
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

T4-DNA-Ligase katalysiert die Bildung von Phosphodiesterbindungen zwischen benachbarten 3′-Hydroxyl- und 5′-Phosphat-Enden in doppelsträngiger DNA. Außerdem werden Einzelstrangbrüche in doppelsträngiger DNA durch T4-DNA-Ligase geschlossen.

Inhalt
T4-DNA-Ligase, geliefert mit 10x konzentriertem Ligationspuffer, der ATP enthält.

Application

Ligation von DNA-Fragmenten mit klebrigen oder glatten Enden.

Biochem/physiol Actions

Hitzeinaktivierung: Das Enzym kann durch Erhitzen (65 °C, 10 Minuten) inaktiviert werden.

Preparation Note

Aktivator: Mg²⁺ (10 mM), DTT
Arbeitslösung: Zur Verdünnung des Enzyms empfiehlt Roche die Verwendung eines Puffers, der die Komponenten des Aufbewahrungspuffers enthält: 20 mM Tris-HCl, 60 mM KCl, 1 mM EDTA, 5 mM Dithoerythritol, 50 % Glycerin (v/v), pH 7,5 (4 °C).

Analysis Note

Qualität

Nach Maßgabe der aktuellen Qualitätskontrollverfahren auf die Abwesenheit von Desoxyribonukleasen und Exonukleasen getestet.

Other Notes

Eine Einheit T4-DNA-Ligase ist die Menge an Enzymaktivität, die 1 nmol ³²P aus Pyrophosphat bei +37 °C in 20 Minuten in Norit-absorbierbares Material umwandelt. Eine Einheit entspricht 0,2 U, bestimmt im Exonuklease-III-Resistenzassay. Verdünnungspuffer: 50 mM Tris-HCl, 10 mM Dithioerythritol, Rinderserumalbumin, 500 μg/ml, pH 7,6 (+25 °C).

Volumenaktivität: 1 x 10³ U/ml; 5 x 10³ U/ml

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash