CT01-5

Reactivo A MTT

Useful in the study of cell & mitochondrial health, MTT is a pale yellow substrate that is cleaved by living cells to yield a dark blue formazan product.

• Sinónimos: MTT Formazan Assay
• UNSPSC Code: 12352207
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32161000

Propiedades

• Quality Segment: 100
• form: solid
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): activity assay: suitable, cell based assay: suitable
• shipped in: wet ice
• storage temp.: 2-8°C

Descripción

General description

Reactivo A: MTT, (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio), 50 mg/vial.

El MTT es un sustrato amarillo pálido que es escindido por las células vivas para producir un producto formazán de color azul oscuro. Este proceso requiere mitocondrias activas; incluso las células recién muertas no escinden cantidades significativas de TTM. El reactivo A es un componente del kit de ensayo del MTT de Chemicon, número de referencia CT01/CT02.

Application

Procedimiento:
1. Realice un ensayo de citotoxicidad mediada por linfocina, mitógeno o complemento utilizando métodos estándar, en placas de cultivo tisular de fondo plano de 96 pocillos de buena calidad óptica (p. ej. Falcon). El volumen final de medio de cultivo tisular en cada pocillo debe ser de 0,1 ml y el medio (por ejemplo RPMI o DMEM) puede contener suero fetal bovino hasta un 10 %.

2. Al final del ensayo, añada 0,01 ml de disolución AB (MTT) a cada pocillo. Mezcle golpeando suavemente el lateral de la bandeja

3. Incube a 37°C para que se produzca la escisión del MTT. Los tiempos óptimos pueden variar según el ensayo, pero cuatro horas es un tiempo adecuado para la mayoría de los propósitos. Al final de este tiempo, el formazán MTT producido en los pocillos que contienen células vivas aparecerá como cristales negros y borrosos en el fondo del pocillo.

4. Añada 0,1 ml de disolución C a cada pocillo. Mezcle bien pipeteando repetidamente con una pipeta multicanal. El HCl convierte el rojo fenol del medio de cultivo tisular en un color amarillo que no interfiere en la medición del formazán procedente del MTT. El isopropanol disuelve el formazán para dar una disolución azul homogénea adecuada para medir la absorbancia.

5. En una hora, mida la absorbancia en un lector de placas ELISA con una longitud de onda de prueba de 570 nm y una longitud de onda de referencia de 630 nm. Después de varias horas a temperatura ambiente, las proteínas séricas pueden comenzar a precipitar debido al ácido/alcohol. Enfriar las placas acelerará la precipitación. Si las placas deben almacenarse antes de la medición, manténgalas a 4° C antes de añadir ácido/alcohol, caliéntelas luego a temperatura ambiente y añada ácido/alcohol justo antes de la lectura.

Resultados:
El ensayo MTT normalmente detectará de 200 a 50 000 células de una línea celular típica, aunque el intervalo útil es de 1 000 a 50 000. Este número puede variar para otros tipos de células. Los ensayos de citotoxicidad deben configurarse de modo que las células control no lisadas den una señal de 0,2 a 0,4, y los ensayos de proliferación produzcan un valor similar a concentraciones meseta. Esto corresponde a unas 20-50 000 células por pocillo con una línea celular típica.

La absorbancia es directamente proporcional al número de células; las células reales no absorben de manera significativa, incluso hasta concentraciones de l x 10⁶ células/ml.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Información de seguridad

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palabra de advertencia: Warning
• Códigos de peligro: H315,H319,H335,H341
• Indicaciones de precaución: P201 - P202 - P261 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338 - P308 + P313
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Muta. 2 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órganos diana: Respiratory system
• Clase de almacenamiento: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• Punto de inflamación (°F): Not applicable
• Punto de inflamación (°C): Not applicable