03-110

RIPAb+ Ago2 - przeciwciało i zestaw starterów zweryfikowane metodą RIP

ascites fluid, from mouse

• Synonim(y): Argonaute-2, czynnik inicjacji translacji eukariotycznej 2C, białko Slicer, białko domeny Piwi
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702

Właściwości

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• antibody form: ascites fluid
• clone: monoclonal
• species reactivity: human
• species reactivity (predicted by homology): bovine
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG1κ
• NCBI accession no.: NP_001158095.1
• UniProt accession no.: Q9UKV8
• shipped in: dry ice

Opis

General description

100 kDa

Ago2 (argonaute-2), znany również jako eukariotyczny czynnik inicjacji translacji 2C (EIF2C2), jest niezbędnym składnikiem odpowiedzi na interferencję RNA (RNAi) kierowaną przez siRNA. Ago2 jest endonukleazą wymaganą do rozwijania dupleksu siRNA i łączenia siRNA w kompleksy wyciszające indukowane RNA (RISC). Ago2 oddziałuje z DICER1 poprzez swoją domenę Piwi. Uważa się, że domena Piwi zapewnia aktywność rozszczepiania RNA poprzez mechanizm podobny do RNazy H. Aktywność Ago2 jest niezbędna do rozwoju embrionalnego, a także do wyciszania genów za pośrednictwem RNA (RNAi).

Immunogen

Syntetyczny peptyd sprzężony z KLH zawierający sekwencję YSGAGPALAPPAPPPPIQG.

Application

Immunoprecypitacja białka wiążącego RNA (mikroRNA):
Lizat RIP przygotowany z komórek HeLa (2 X¹⁰⁷ równoważników^komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 5 µL normalnej mysiej IgG lub 5 µL przeciwciała Anti-Ago2 i zestawu do immunoprecypitacji białek wiążących RNA Magna RIP^® (nr kat. 17-700).
Pomyślna immunoprecypitacja mikroRNA związanego z Ago2 została zweryfikowana za pomocą testu TaqMan microRNA, hsa-miR-23a. (Patrz rysunki).
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole Magna RIP (nr kat. 17-700) lub EZ-Magna RIP (nr kat. 17-701).


Immunoprecypitacja z lizatu RIP:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat RIP z komórek HeLa (2 X¹⁰⁶ równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 0,5 µl normalnej mysiej IgG lub przeciwciała anty-Ago2. Wytrącone białka (pas 1: mysie IgG, pas 2: anty-Ago2) i lizat całych komórek HeLa (pas 3) rozdzielono metodą elektroforezy, przeniesiono na nitrocelulozę i wysondowano przeciwciałem anty-Ago2 (rozcieńczenie 1:5000).
Białka wizualizowano przy użyciu koziego przeciwciała anty-mysiego sprzężonego z HRP i detekcji chemiluminescencji.
(Patrz rysunki).

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Metabolizm RNA i białka wiążące

Białko wiążące RNA (RBP)

Zestaw RIPAb+ Ago2 -RIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Biochem/physiol Actions

Rozpoznaje Ago2.

Packaging

10 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~5 μL przeciwciała na RIP (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Ago2 (mysia monoklonalna IgG1κ). Jedna fiolka zawierająca 50 µL wodobrzusza z 0,05% azydkiem sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Normalna mysia IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 μg oczyszczonej mysiej IgG w 125 µL buforu puchlinowego zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery RIP, FOS. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego genu FOS. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: GAG AGC TGG TAG TTA GTA GCA TGT TGA
REV: AAT TCC AAT AAT GAA CCC AAT AGA TTA GTT A

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania.
Zalecenia dotyczące postępowania: Po otrzymaniu, a przed zdjęciem nasadki, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu

Analysis Note

Kontrola
Zawiera mysie przeciwciało IgG kontroli ujemnej i startery kontrolne specyficzne dla ludzkiego FOS.

RNA Binding Protein Immunoprecipitation:
RIP Lysate prepared from HeLa cells (2 X 10⁷ cell equivalents per IP) were subjected to immunoprecipitation using 5 µL of either a normal mouse IgG or 5 µL of Anti-Ago2 antibody and the Magna RIP^® RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Cat. # 17-700).
Successful immunoprecipitation of Ago2-associated RNA was verified by qPCR using RIP Primers FOS (Please see figures).
Please refer to the Magna RIP (Cat. # 17-700) or EZ-Magna RIP (Cat. # 17-701) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• Co się dzieje?: WGK 1