03-206

RIPAb+ hnRNP U - przeciwciało i zestaw primerów zweryfikowane metodą RIP

clone 3G6, from mouse

• Synonim(y): Czynnik przyłączania rusztowania A, heterogeniczna rybonukleoproteina jądrowa U, heterogeniczna rybonukleoproteina jądrowa U (czynnik przyłączania rusztowania A), hnRNP U, białko hnRNP U, białko jądrowe p120
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702

Właściwości

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• antibody form: purified immunoglobulin
• clone: 3G6, monoclonal
• species reactivity: human
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG2bκ
• NCBI accession no.: NP_004492.2
• UniProt accession no.: Q00839
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Obliczona masa cząsteczkowa wynosi 90 kDa Jednak białko jest zwykle obserwowane przy ~ 120 kDa (Dreyfuss, G., et al. (2002). Nat Rev Mol Cell Biol. 3(3):195-205).

Przeciwciała RIPAb+ są oceniane przy użyciu testu immunoprecypitacji białka wiążącego RNA (RIP). Każdy zestaw przeciwciał RIPAb+ zawiera ujemne przeciwciało kontrolne w celu zapewnienia swoistości reakcji RIP i jest weryfikowany pod kątem koimmunoprecypitacji RNA związanego specyficznie z immunoprecypitowanym białkiem wiążącym RNA będącym przedmiotem zainteresowania. W stosownych przypadkach zestaw RIPAb+ zawiera również startery kontrolne do ilościowego RT-PCR (startery RIP) w celu biologicznego potwierdzenia wyników IP poprzez udaną ko-precypitację określonych docelowych RNA, takich jak informacyjny RNA. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów RIP podczas stosowania przeciwciała w ich kontekście eksperymentalnym. Jeśli nie dostarczono testu specyficznego dla celu, zestaw RIPAb+ jest walidowany przy użyciu zautomatyzowanego testu opartego na mikroprzepływach poprzez wzbogacenie wykrywalnego RNA w stosunku do kontrolnej immunoprecypitacji.
Białka z rodziny heterogenicznych rybonukleopartykul jądrowych (hnRNP) tworzą zróżnicowaną strukturalnie grupę białek wiążących RNA, pełniących różne funkcje. Ostatnio wykazano, że białka hnRNP utrudniają komunikację między czynnikami związanymi z różnymi miejscami splicingu. hnRNP-U, określany również jako czynnik przyłączania rusztowania A (SAF-A), wiąże się z pre-mRNA i elementami DNA macierzy jądrowej / regionu przyłączania rusztowania.

Immunogen

Epitop: Nieznany

Rekombinowane białko odpowiadające ludzkiemu hnRNP U.

Application

Immunoprecypitacja z lizatu RIP:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat RIP z komórek HeLa (~2 X 10E7 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 5 µg normalnej mysiej IgG (nr kat. CS200621) lub 5 µg przeciwciała Anti-hnRNP U (nr kat. CS207320). Dziesięć procent wytrąconych białek (pas 1: normalna mysia IgG, pas 2: hnRNP U) i lizat całych komórek HeLa (pas 3) rozdzielono metodą elektroforezy, przeniesiono na nitrocelulozę i wysondowano przeciwciałem anty-hnRNP U (nr kat. CS207320, 1:1000). Białka wizualizowano przy użyciu zestawu One-Step IP-Western (GenScript nr kat. L00231).
Strzałka wskazuje hnRNP U. (Rysunek 2).
Zautomatyzowana elektroforetyczna separacja i analiza RNA oparta na mikroprzepływach (MFE):
Reprezentatywne dane partii.
Lizat RIP przygotowany z komórek HeLa (2 X 10E7 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 5 µg 1. normalnej mysiej IgG (nr kat. CS200621) lub 2. Przeciwciała anty-hnRNP U (nr kat. CS207320) i zestawu do immunoprecypitacji białek wiążących RNA Magna RIP (nr kat. 17-700).
Pomyślna immunoprecypitacja RNA związanego z hnRNP U została zweryfikowana przez zautomatyzowaną elektroforetyczną separację i analizę RNA opartą na mikroprzepływach. Szczegółowe informacje na temat eksperymentu można znaleźć w protokole Magna RIP (nr kat. 17-700) lub EZ-Magna RIP (nr kat. 17-701). Elektroferogramy zostały wygenerowane przez wykreślenie intensywności fluorescencji w stosunku do czasu migracji (Rysunek 3A). Na podstawie tych danych utworzono wirtualny widok żelu (Rysunek 3B).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat komórek K562 poddano działaniu anty-hnRNP U, klon 3G6 (0,01 µg/ml). Białka uwidoczniono przy użyciu przeciwciała wtórnego Goat Anti-Mouse IgG sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.

Strzałka wskazuje hnRNP U (~120 kDa). (Rysunek 4).

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Metabolizm RNA i białka wiążące

Apoptoza - Dodatkowe

Zestaw RIPAb+ hnRNP U -RIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało hnRNP U i specyficzne kontrolne startery PCR.

Biochem/physiol Actions

To przeciwciało rozpoznaje hnRNP U.

Packaging

10 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~5 μg przeciwciała na RIP (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Format: Oczyszczony

Oczyszczone białko G

Przeciwciało anty-hnRNP U (mysie monoklonalne), część nr CS207320. Jedna fiolka zawierająca 50 µg białka G oczyszczonej mysiej IgG1 w 0,1 M Tris-glicyny, pH 7,4, 0,15 M NaCl, 0,05% azydku sodu i 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Normalna mysia IgG, część nr CS200621. Jedna fiolka zawierająca 125 µg oczyszczonej mysiej IgG w 125 µL buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Primery RIP, białko rybosomalne S19, część # CS207321. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego c-myc 3′ UTR. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: ACG CGA GCT GCT TCC ACA G
REV: AGC TGC CAC CTG TCC GGC

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania.
Zalecenia dotyczące postępowania: Po otrzymaniu, a przed zdjęciem nasadki, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu. Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera kontrolę ujemną, normalne mysie przeciwciało IgG i startery kontrolne specyficzne dla cDNA ludzkiego białka rybosomalnego S19.

RNA Binding Protein Immunoprecipitation:
Representative lot data.
RIP Lysate prepared from HeLa cells (2 X 10E7 cell equivalents per IP) were subjected to immunoprecipitation using 5 µg of either a normal mouse IgG or 5 µg of Anti-hnRNP U antibody and the Magna RIP^® RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Cat. # 17-700).
Successful immunoprecipitation of hnRNP U-associated RNA was verified by qPCR using RIP Primers Ribosomal Protein S19, (Figure 1).
Please refer to the Magna RIP (Cat. # 17-700) or EZ-Magna RIP (Cat. # 17-701) protocol for experimental details.

Other Notes

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• Co się dzieje?: WGK 1