M30 CytoDEATH

Name: M30 CytoDEATH
Brand: ROCHE

lyophilized (clear, colorless solution after reconstitution)

Synonym(e):

cytodeath, m30

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Über diesen Artikel

UNSPSC Code:

12352200

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Eigenschaften

form

lyophilized (clear, colorless solution after reconstitution)

usage

sufficient for 250 tests (12140349001), sufficient for 50 tests (12140322001)

manufacturer/tradename

Roche

shipped in

wet ice

storage temp.

2-8°C

Beschreibung

General description

Monoklonaler Maus-Antikörper (Klon M30, Maus-IgG_2b) wird für den Nachweis der Apoptose in Epithelzellen verwendet (Caspase-Spaltprodukt von Zytokeratin 18). Er wird in lyophilisierter, stabilisierter Form in Formalinqualität geliefert.
Während der Apoptose werden lebenswichtige intrazelluläre Proteine gespalten. Die Proteasen, die diesen Prozess vermitteln, werden Caspasen (englisch „cysteinyl-aspartate specific protease“) genannt. Caspasen werden als Zymogene exprimiert, die von verschiedenen Apoptose-Induktoren aktiviert werden. Nach ihrer Aktivierung aktiviert eine einzelne Caspase eine Caspasen-Kaskade. Bis vor Kurzem war nicht bekannt, dass die frühen Ereignisse des apoptotischen Prozesses Auswirkungen auf Zytokeratine haben, insbesondere auf Zytokeratin 18 (CK18). Nun wurde gezeigt, dass der M30-Antikörper eine spezifische Caspase-Spaltstelle in Zytokeratin 18 erkennt, die in nativen CK18 normaler Zellen nicht nachgewiesen werden kann. Daher ist der M30 CytoDEATH-Antikörper ein einzigartiges Hilfsmittel für den bequemen und zuverlässigen Nachweis sehr früher apoptotischer Ereignisse in einzelnen Zellen und Gewebeschnitten.

Assaydauer: 2 Stunden für Immunfluoreszenz von Zellen, 3,5 Stunden für Gewebefärbungen (Entwachsung nicht inbegriffen)
Probenmaterial: Adhärente Zellen, Gewebeproben (routinemäßig fixierte Paraffinschnitte, Kryostatschnitte)

Application

Der M30 CytoDEATH Antikörper wird für den Nachweis von frühen Ereignissen des apoptotischen Prozesses in Zellen und Gewebeschnitten genutzt; er erkennt ein spezifisches Epitop von Zytokeratin 18, das nach der Aufspaltung durch Caspasen vorliegt. Nachweis der Apoptose durch Anwendung des Antikörpers M30 auf fixierte Proben mit anschließendem Einsatz sekundärer Nachweissysteme für Immunhistochemie, Immunzytochemie und Durchflusszytometrie.

Biochem/physiol Actions

Der Antikörper M30 CytoDEATH bindet an das Caspase-gespaltene, formalinbeständige Epitop von Zytokeratin 18 (CK 18), einem Zytoskelettprotein. Die Immunreaktivität des Antikörpers ist auf das Zytoplasma von apoptotischen Zellen beschränkt.

Features and Benefits

Praktisch: Anwenderfreundliches Standardprotokoll
Klare Ergebnisse: Apoptotische Zellen können sehr leicht von normalen Zellen unterschieden werden
Früher Nachweis der Apoptose: Nachweis von Caspase-gespaltenem Zytokeratin 18; Caspase-Aktivität ist einer der frühesten Apoptose-Marker
Geeignet für in Paraffin eingebettetes Gewebe: Geeignet für routinemäßig fixierte Gewebeproben, retrograde Studien sind möglich

Physical form

Weißes Lyophilisat. Der Antikörper wurde in Gegenwart von proteinoiden Stabilisatoren lyophilisiert.

Preparation Note

Arbeitskonzentration: Die Konzentration der Stammlösung liegt bei 6,6 ng/μl. Für Qualitätskontrolltests zur Freigabe des Produkts wird an einem zellulären Modell (mit TNF-α/Actinomycin D behandelte HeLa-Zellen) wie in der Packungsbeilage beschrieben ein Funktionstest durchgeführt. Die Proteinmenge ist nur ein Teil des Qualitätskontrolltests für die Produktfreigabe der Stammlösung und wird aus diesem Grund in der Dokumentation nicht erwähnt.
Arbeitslösung: Verfahren für Immunfluoreszenztests von Zellen und Durchflusszytometrie

Wenn andere Nachweismethoden oder Probenmaterialien genutzt werden, können andere Bedingungen herrschen und entsprechende Anpassungen nötig sein.

Für die Anwendung die Antikörper-Stammlösung in Inkubationspuffer (M30 CytoDEATH) verdünnen.
Hinweis: Die Antikörperlösungen sollten frei von Präzipitaten sein. Zentrifugieren Sie die Lösungen bei Bedarf vor der Verwendung mit hoher Drehzahl.

Zusätzlich erforderliche Arbeitslösungen für Immunfluoreszenztest und Durchflusszytometrie:

Waschpuffer: PBS mit 0,1 % Tween 20
Inkubationspuffer: PBS mit BSA und 0,1 % Tween 20

Verfahren für Immunhistochemie

Wenn andere Nachweismethoden oder Probenmaterialien genutzt werden, können andere Bedingungen herrschen und entsprechende Anpassungen nötig sein.

Für die Anwendung die Antikörper-Stammlösung in Inkubationspuffer verdünnen.
Hinweis: Die Antikörperlösungen sollten frei von Präzipitaten sein. Zentrifugieren Sie die Lösung bei Bedarf vor der Verwendung mit hoher Drehzahl.

Für die Durchführung der immunhistochemischen Färbung erforderliche Arbeitslösungen:

Waschpuffer: PBS mit 0,1 % Tween 20
Inkubationspuffer: PBS mit BSA und 0,1 % Tween 20
Zitronensäurepuffer: 2 g/l Zitronensäure, pH 6 angepasst mit 1 N NaOH
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): Die Antikörper-Stammlösung ist bei 2 bis 8 °C 6 Monate stabil. Alternativ kann sie bei -15 bis -25 °C in Aliquoten gelagert werden.
Hinweis: Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden.

Kurzes Protokoll
Für in Paraffin eingebettetes Gewebe: