Testování sterility

Metody testování sterility farmaceutických přípravků

Testování sterility farmaceutických přípravků podle lékopisů se řídí normami USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>, které vyžadují kultivaci vzorků ve dvou samostatných živných médiích po dobu 14denní inkubace. K zajištění komplexního pokrytí mikroorganismů se používají dvě kultivační média: tekuté thioglykolátové médium (FTM) pro anaerobní a aerobní bakterie (inkubované při teplotě 32,5 °C) a sójovo-kaseinové médium (SCDM), nazývané také trypticase-sójový bujón (TSB), pro aerobní bakterie a houby (inkubované při teplotě 22,5 °C). Jakákoli zákalnost pozorovaná po inkubaci naznačuje potenciální mikrobiální kontaminaci a musí být prošetřena.

Jsou uznávány dvě metody uvedené v lékopisech: membránová filtrace a přímé naočkování. Volba metody závisí na povaze přípravku, formátu jeho balení a jeho fyzikálně-chemických vlastnostech. Pokud to povaha přípravku umožňuje, je metodou volby membránová filtrace, jak uvádějí USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>, a to díky její vyšší citlivosti a schopnosti odstranit inhibiční látky. Přímé naočkování zůstává použitelné v případech, kdy není filtrace proveditelná.

Zatímco 14denní inkubační doba zůstává lékopisným standardem, rychlé mikrobiologické metody (RMM) založené na technologii ATP bioluminiscence jsou regulačními orgány stále častěji akceptovány pro produkty s krátkou dobou trvanlivosti, včetně buněčných a genových terapií. Nová kapitola USP <73> – „Mikrobiologické metody založené na bioluminiscenci ATP pro detekci kontaminace v přípravcích s krátkou dobou trvanlivosti“ – poskytuje jasný regulační rámec pro zavedení RMM a pro validaci a implementaci této technologie s účinností od srpna 2025.

Bez ohledu na zvolenou metodu platí požadavky na integritu dat stejně pro všechny pracovní postupy při testování sterility: všechna testovací data musí být plně sledovatelná, připravená k auditu a v souladu s ALCOA++, 21 CFR část 11 a přílohou 11 EU – od přijetí vzorku až po zaznamenání konečného výsledku.

Testování sterility pomocí membránové filtrace

Membránová filtrace je předepsanou metodou volby pro filtrovatelné farmaceutické přípravky podle USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>. Vzorek se nechá projít membránovým filtrem o velikosti pórů 0,45 µm, kde jsou mikroorganismy zadrženy a následně kultivovány ve vhodných živných médiích.

Tato metoda nabízí oproti přímému naočkování zásadní výhody:

• Vyšší citlivost — celý vzorek nebo směs vzorků se filtruje přes jedinou membránu
• Odstranění inhibitorů — antimikrobiální sloučeniny, jako jsou antibiotika nebo konzervační látky, lze před inkubací vypláchnout, čímž se zabrání falešně negativním výsledkům
• Ochrana uzavřeného systému — moderní filtrační zařízení s uzavřeným systémem zajišťují, že produkt není během testování nikdy vystaven vnějšímu prostředí, což výrazně snižuje riziko vnější kontaminace a neplatných výsledků testů

Použití uzavřených jednorázových membránových filtračních zařízení je považováno za osvědčený postup v prostředích pro testování sterility podle GMP, a to jak v laminárních komorách, tak v izolátorech.

Rychlé mikrobiologické metody (RMM) pro testování sterility

Vzhledem k tomu, že se regulační rámce vyvíjejí tak, aby zohledňovaly inovace, získávají rychlé mikrobiologické metody (RMM) stále větší uznání jako vědecky ověřené alternativy k tradičním testům sterility podle lékopisů. RMM jsou obzvláště relevantní pro produkty s krátkou dobou použitelnosti – jako jsou buněčné a genové terapie, radiofarmaka a biologické přípravky s krátkou dobou použitelnosti –, u nichž je 14denní inkubační doba neslučitelná s termíny uvolnění produktu na trh nebo s harmonogramy léčby pacientů.

Mezi nejzavedenější technologie RMM patří ATP bioluminiscence, která detekuje světlo vyzařované životaschopnými mikroorganismy po reakci s bioluminiscenčním činidlem, což umožňuje rychlou, citlivou a kvantitativní detekci kontaminace. Na rozdíl od tradičních metod založených na inkubaci nahrazuje ATP bioluminiscence subjektivní vizuální hodnocení zákalu kvantitativním měřením pomocí přístrojů, což umožňuje dřívější a reprodukovatelnější interpretaci výsledků.

Zavedení normy USP <73> – „Mikrobiologické metody založené na ATP bioluminiscenci pro detekci kontaminace v produktech s krátkou trvanlivostí“, s účinností od srpna 2025 – představuje významný regulační milník, který laboratořím poskytuje jasný lékopisný rámec pro zavádění a validaci testování sterility založeného na RMM. To doplňuje norma USP <1071>, která poskytuje širší pokyny k zavádění a validaci rychlých mikrobiálních metod.

Metody RMM jsou vhodné nejen pro testování sterility konečného produktu, ale také pro monitorování mikrobiální zátěže v průběhu celého výrobního procesu, čímž laboratořím nabízejí univerzální a normám vyhovující řešení pro celou řadu aplikací v oblasti kontroly kvality.

Systém Milliflex® Rapid System 2.0 je plně v souladu s požadavky normy USP <73> a umožňuje vaší laboratoři zavést validovaný a normám vyhovující pracovní postup testování sterility založený na metodách RMM — s dodáním výsledků do 5 dnů.

Integrita dat a správa dat při testování sterility

Výsledek testu sterility je spolehlivý pouze do té míry, do jaké jsou spolehlivé údaje, na nichž je založen — a regulační orgány po celém světě kladou integritu dat do centra dodržování mikrobiologických požadavků GMP. Kromě metodiky se stejný důraz klade i na to, jak jsou data ze zkoušek sterility generována, zaznamenávána a uchovávána po celou dobu životního cyklu zkoušky. Regulační orgány, včetně FDA, EMA a PMDA, vyžadují, aby všechna laboratorní data splňovala zásady ALCOA++: data musí být přiřaditelná (Attributable), čitelná (Legible), souběžná (Contemporaneous), originální (Original) a přesná (Accurate), přičemž se kladou další požadavky na úplnost, konzistenci a dostupnost.

V USA definuje předpis 21 CFR část 11 požadavky na elektronické záznamy a elektronické podpisy, čímž se digitální dokumentace stává z právního hlediska rovnocennou papírovým záznamům. V Evropě stanovuje příloha 11 směrnice EU odpovídající požadavky na počítačové systémy v prostředích GMP. Tyto předpisy společně stanovují jasný rámec pro integritu dat v laboratořích kontroly kvality, včetně testování sterility: sběr dat v reálném čase, automatické generování auditní stopy a kompletní digitální sledovatelnost od začátku do konce – od identifikace obsluhy a údajů o přístrojích až po informace o vzorcích a konečné výsledky – jsou regulačními orgány při inspekcích GMP stále častěji očekávány a považovány za osvědčenou praxi v oboru. Software a mobilní aplikace M-Trace® pomáhají vaší laboratoři splnit tyto regulační požadavky.