Testování sterility

Postupy pro testování sterility se uplatňují u výrobků v mnoha odvětvích, včetně výrobců potravin a nápojů, avšak hlavními odvětvími jsou farmaceutický a zdravotnický sektor, kde testování sterility výrobků zůstává pro mikrobiology zásadním a rutinním úkolem.

• Metody testování sterility ve farmaceutickém průmyslu
• Metody testování sterility pro zdravotnické prostředky
• Pracovní postup při testování sterility

Metody testování sterility ve farmaceutickém průmyslu

Metody testování sterility farmaceutických výrobků podle lékopisu vyžadují kultivaci vzorků ve dvou samostatných médiích. Při testování sterility se používají dva různé typy kultivačních médií, aby se podpořil růst zbytkových anaerobních bakterií, stejně jako aerobních bakterií a plísní. Tekuté thioglykolátové médium (FTM) se obvykle používá k kultivaci anaerobních a některých aerobních bakterií, zatímco sójovo-kaseinové médium (SCDM) se obvykle používá k kultivaci plísní a aerobních bakterií. Vzorky se před vyšetřením inkubují po dobu 14 dnů při teplotě 32,5 °C, resp. 22,5 °C. Jakékoli zakalení v kultivačních médiích může naznačovat růst a musí být vyšetřeno. Existují dvě doporučené metody testování sterility farmaceutických přípravků: membránová filtrace a přímá inokulace.

Testování sterility membránovou filtrací

Testování sterility membránovou filtrací je preferovanou regulační metodou pro filtrovatelné farmaceutické produkty, jak je uvedeno v USP <71>, Evropském lékopise < 2.6.1> a Japonském lékopise <4.06>. Vzorky se nechají projít membránovým filtrem o velikosti 0,45 µm v filtrační nádobě a pro inkubaci se přidá kultivační médium. Tato metoda testování sterility může poskytnout vyšší citlivost ve srovnání s jinými metodami, protože celý vzorek nebo směsný vzorek prochází jediným filtrem. Filtrace také poskytuje možnost vypláchnout složky ve vzorku, které mohou způsobit zakalení nebo inhibovat růst, jako jsou antibiotika nebo konzervační látky.

Testování sterility přímým naočkováním

Při přímém naočkování se z jednotky vzorku asepticky odebere malý objem vzorku a před inkubací se naočkuje přímo do vhodného objemu růstového média. Ačkoli je tato metoda testování jednoduchá, může mít některé významné omezení. Do kultivačního média lze naočkovat pouze malé objemy produktu, což omezuje citlivost testu. Pokud se vzorek po naočkování jeví jako zakalený nebo kalný, může být na konci inkubačního období obtížné rozlišit zákal způsobený růstem mikroorganismů. Navíc, pokud má produkt antimikrobiální vlastnosti, musí být vzorek neutralizován, aby nebyl inhibován růst mikroorganismů.

Metody testování sterility zdravotnických prostředků

Pro testování sterility zdravotnických prostředků se doporučuje testování sterility přímým přenosem. Testovaný prostředek je po celou dobu inkubace v přímém kontaktu s testovacím médiem, během níž se jakékoli mikroorganismy v prostředku nebo na něm budou množit a šířit. Kromě toho se u produktů s dutými trubkami, jako jsou transfuzní a infuzní sestavy, u nichž je tekutinová cesta označena jako sterilní, upřednostňuje testování sterility proplachováním produktu. Lumen produktu se propláchne proplachovací tekutinou, eluát se filtruje přes membránu a umístí se do vhodného média pro inkubaci.

Průběh testování sterility

1. Příprava testu – Vložte hadičku membránového filtračního zařízení do pumpy

2. Předvlhčení filtru – Předvlhčete membránové filtrační zařízení, abyste optimalizovali filtraci a minimalizovali vazbu produktu na filtr.

3. Filtrace vzorku – Filtrujte stejné množství produktu do obou nádobek. Mikroorganismy jsou zadrženy filtrem s velikostí pórů 0,45 µm.

4. Oplachování – Všechny inhibiční sloučeniny se opláchnou pomocí vhodného oplachového roztoku (roztoků).

5. Naplnění kultivačních médií – Membránová filtrační zařízení se naplní sterilními kultivačními médii TSB a FTM.

6. Doba inkubace – 14 dní.

7. Konečné výsledky testu – vizuální kontrola zákalu / absence zákalu.