17-622

ChiPAb+ trimetil-histona H3 (Lys27): Conjunto de anticuerpo y cebador validado para CHIP

from rabbit, purified by using Protein A

• Sinónimos: Chip Antibody and primer set, H3K27me3 ChIP, H3K27me3, Histone H3 (tri methyl K27), Histone H3K27me3, Histone H3K27me3 ChIP
• Código UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.32

Propiedades

• origen biológico: rabbit
• Nivel de calidad: 100
• clon: polyclonal
• purificado por: using Protein A
• reactividad de especies: human, mouse
• fabricante / nombre comercial: ChIPAb+; Upstate^®
• técnicas: ChIP: suitable; western blot: suitable
• Nº de acceso NCBI: NP_003484
• Nº de acceso UniProt: Q16695
• Condiciones de envío: dry ice
• Información sobre el gen: human ... H3F3B(3021)

Descripción

Descripción general

17 kDa

La metilación de las histonas puede ocurrir en dos residuos diferentes: arginina o lisina. La metilación de la histona puede estar asociada con la activación o la represión de la transcripción, dependiendo del residuo metilado. La lisina 27 de la histona H3 puede estar mono, di o trimetilada (histona H3 monometil Lys27, histona H3 dimetil Lys27 o histona H3 trimetil Lys27) por diferentes histona metiltransferasas como la EZH2 o la NSD3. La metilación de este residuo se asocia principalmente con la represión de la transcripción.

Todos los anticuerpos ChiPAb+ se validan individualmente para precipitación de la cromatina, en cada lote
en todo momento. Cada conjunto de anticuerpos ChiPAb+ incluye cebadores de control (probados en cada lote mediante qPCR) para validar biológicamente los resultados de IP en un contexto específico de locus. Se proporcionan el protocolo de qPCR y las secuencias de los cebadores, lo que permite a los investigadores validar los protocolos de ChIP al utilizar nuestro anticuerpo en el contexto de su cromatina.
Cada conjunto incluye también un anticuerpo de control negativo para garantizar la especificidad de la reacción de ChIP. El conjunto de ChiPAb+ trimetil-histona H3 (Lys27) incluye el anticuerpo anti-trimetil-histona H3 (Lys27), un anticuerpo de control negativo (IgG de conejo purificada) y cebadores para qPCR que amplifican una región de 139 pb del satélite alfa humano. Los anticuerpos anti-trimetil-histona H3 (Lys27) y controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la trimetil-histona H3 (Lys27).

Inmunógeno

Epítopo: Trimetil Lys27

Péptido sintético 2X-ramificado, conjugado con KLH que contiene la secuencia ...AR(me3K)SAP... en la que me3K corresponde a la trimetil-lisina en el resto 27 de la histona H3 humana.

Aplicación

Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear

Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos a partir de 2x10⁶ células HeLa se sometió a inmunoprecipitación utilizando 4 μg de anticuerpo anti-trimetilhistona H3 (Lys27) purificado o IgG de conejo normal y el kit Magna ChIP A (Nº ref. 17-610). El enriquecimiento satisfactorio de fragmentos de ADN asociados a la trimetil-histona H3 (Lys27) se verificó mediante qPCR utilizando los cebadores GAPDH para ChIP que flanquean el promotor de GAPDH humano y los cebadores dirigidos al promotor de MyoD humano.
Para conocer los detalles experimentales, consulte los protocolos del kit EZ-Magna CHIP A (Nº de ref. 17-408) o EZChIP (Nº de ref. 17-371).

Análisis mediante Western Blot:
La histona H3 recombinante (carril 2) y los extractos ácidos de las células HeLa (carril 1) se resolvieron por electroforesis, se transfirieron a nitrocelulosa y se probaron con una dilución 1:5000 de anti-trimetil histona H3 Lys27 (0,4 μg/ml).
Las proteínas se visualizaron utilizando un anticuerpo secundario de cabra anti- conejo conjugado con HRP y un sistema de detección de quimioluminiscencia (consulte las figuras).

Juego de anticuerpos y cebadores validados para ChIP de trimetil-histona H3 (Lys27), que incluye el anticuerpo de calidad ChIP y cebadores de PCR de control específicos utilizados para la inmunoprecipitación de cromatina de H3K27Me3.

Subcategoría de investigación
Histonas

Acciones bioquímicas o fisiológicas

Se prevé amplia reactividad cruzada entre especies.

trimetil-histona H3 (Lys27).

Envase

25 ensayos por kit, ~4μl por inmunoprecipitación de la cromatina.

Forma física

Anti-trimetil-histona H3 (Lys27) (IgG policlonal de conejo). Un vial que contiene 100 μg de IgG purificada en proteína A en tampón de 100 μl que contiene Tris-glicina 0,1 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M con azida sódica al 0,05 %. Líquido a -20°C.

IgG normal de conejo. Un vial que contiene 125 μg de IgG purificada de conejo en 125 μl de tampón de conservación que contiene azida sódica al 0,1 %. Almacenar a -20°C.

Cebadores para CHIP de satélite alfa humano. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador de control específico para el satélite alfa humano. Conservar a -20°C.
DIR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

Nota de preparación

1 año a -20°C desde la fecha de envío.

Nota de análisis

Control
1 vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador de control específico para el satélite alfa humano. Conservar a -20°C.

DIR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC

INV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina preparada a partir de 2x10⁶ células HeLa se sometió a inmunoprecipitación utilizando 4 μg de anticuerpo purificado o IgG normal de conejo y el kit Magna ChIP^® A (Nº de ref. 17-610). El enriquecimiento satisfactorio de fragmentos de ADN asociados a la trimetil-histona H3
(Lys27) se verificó mediante qPCR utilizando los cebadores para ChIP del satélite alfa humano (consulte las figuras).
Para conocer los detalles experimentales, consulte los protocolos del kit EZ-Magna CHIP A (Nº de ref. 17-408) o EZ-CHIP (Nº de ref. 17-371).

Otras notas

Anti-trimetil histona H3(Lys27) policlonal, 1 vial

Suero policlonal de conejo de control, 1 vial

Conjunto de cebadores del satélite alfa humano, 1 vial

Información legal

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Cláusula de descargo de responsabilidad

Salvo que se indique lo contrario en nuestro catálogo o en otra documentación de la empresa que acompañe al producto, nuestros productos están indicados sólo para investigación y no deben utilizarse para ningún otro propósito, como, entre otros, usos comerciales no autorizados, diagnóstico in vitro, usos terapéuticos ex vivo o in vivo o cualquier tipo de consumo o aplicación en humanos o animales.

Información de seguridad

• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Punto de inflamabilidad (°F): Not applicable
• Punto de inflamabilidad (°C): Not applicable