更多实验方案和选择指南请见分子生物学指南。

酵母生长实验方案简介

酵母因能够快速生长并具有分散的细胞而被认为是用于真核生物研究的模范系统。此外,可以相对容易地完成酵母细胞的复制铺板和突变分离,并且它们也具有明确的遗传系统。最为重要的是,酵母具有高度多功能的DNA转化系统,可有效用于蛋白质的生产。

酵母培养

在一般实验应用中,酵母通常在30 °C下在YPD或合成培养基中生长。我们可提供用于酵母培养的以下生长培养基和补充剂:

表1.酵母培养基
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表2.合成的营养缺陷型培养基补剂(搭配不含氨基酸的酵母氮基使用,货号Y0626)。
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表3.其他酵母培养补剂
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有关酵母培养基的更多详细信息,请参阅我们的文章 酵母培养基简介

酵母生长实验方案

下面给出的实验方案可用于在液体和固体培养基中生长和维持酵母。

YPD肉汤中的酵母生长

  1. 将50g产品(产品编号Y1375)悬浮于1L蒸馏水中。
  2. 在121 °C下高压灭菌15分钟。
  3. 在装有制备液体培养基的无去垢剂的试管 / 烧瓶中接种酵母培养物(来自酵母肉汤 / 培养板),参见步骤1和2(培养基不应超过培养管容量的三分之一或烧瓶总容量的五分之一)。
  4. 略微涡旋内容物以分散细胞。
  5. 在振动培养箱中以300 rpm(对烧瓶)或350 rpm(对培养管)孵育培养物。

YPD琼脂中的酵母生长

  1. 将65g产品(产品编号Y1500)悬浮于1L蒸馏水中。
  2. 在搅拌的同时加热至沸腾以完全溶解所有成分。
  3. 在121 °C下高压灭菌15分钟。
  4. 将约25-30 mL琼脂培养基倒入无菌培养板中,置于层流室中待其凝固。
  5. 在琼脂板上划线(来自于YPD板的酵母)/ 涂布(来自于肉汤的酵母)细胞,并在30 °C下孵育。

注意:在大约24小时后可以观察到单个酵母菌落,但在其可用于复制接种之前,需要孵育48小时以上。在使用合成的营养缺陷型培养基补剂的情况下,酵母培养物的生长速率约慢50%。

酵母菌株保存与复苏

使用上述方法培养的酵母细胞可以在甘油中在-70 °C下冷冻保存3年以上,或在营养丰富的斜面培养基中在4 °C下保存6个月至一年。含有酵母细胞的YPD板用Parafilm®密封后也可以在4 °C下保存2-3个月。保存和复苏酵母细胞的实验方案如下:

酵母细胞保存

  1. 配制30%(w / v)无菌甘油溶液(产品编号G5516)。
  2. 将1.0 mL甘油溶液加入到4 mL有螺旋盖的无菌小管中。
  3. 取1.0 mL早期为静止期 / 后期为对数增殖期的酵母肉汤
    或者从刚培养好的板上刮下大量接种物。
  4. 重悬于1 mL 30%无菌甘油溶液中。
  5. 混合,在干冰上冷冻,并保存于-70 °C下。
    说明:酵母细胞在8%(v / v)二甲基亚砜(DMSO,产品编号D8418)中的储存方法类似。

酵母菌株复苏

  1. 用无菌牙签或细菌接种针刮擦冷冻的原液。
  2. 将酵母细胞划在合适的培养板上,并在30 °C下孵育。
    注意:避免解冻原液。如果原液解冻,则需要充分涡旋再重新冷冻。
材料
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参考文献

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Parafilm is a registered trademark of Bemis Company, Inc.