[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Klonowanie i ekspresja](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/genomics/cloning-and-expression)Wektory ekspresyjne systemu 3xFLAG® do ultraczułego wykrywania rekombinowanych białek # Wektory ekspresyjne systemu 3xFLAG® do ultraczułego wykrywania rekombinowanych białek System 3xFLAG® stanowi udoskonalenie oryginalnego systemu poprzez połączenie trzech tandemowych epitopów FLAG® dających łącznie 22 aminokwasy (__Rysunek 1__). Wykrywanie białek fuzyjnych zawierających 3xFLAG® jest wzmocnione do 200 razy bardziej niż jakikolwiek inny system. Podobnie jak oryginalny znacznik FLAG, 3xFLAG® jest hydrofilowy, zawiera miejsce rozszczepienia Enterokinazy i jest stosunkowo mały. Dlatego ryzyko zmiany funkcji białka, blokowania innych epitopów lub zmniejszenia rozpuszczalności jest zminimalizowane. W przypadku niskiego poziomu ekspresji, 3xFLAG® jest idealnym rozwiązaniem. Nasz wybór wektorów  CMV zapewnia opcje dla przejściowej lub stabilnej ekspresji 3xFLAG® białek fuzyjnych. - __Ultrasensitive System__ - Detect < 10 femtomoli przy użyciu przeciwciał ANTI-FLAG® (__Rysunek 2__); Idealny w przypadkach niskiego poziomu ekspresji w komórkach ssaków. - __Superior Detection__ - 20-200x bardziej czuły niż jakikolwiek inny system (__Rysunek 3__). - __Wszechstronność__ - Ulepszona detekcja dla immunoprecypitacji, Western blot i immunocytochemii. - __Szeroki wybór produktów do wykrywania i oczyszczania__ - Przeciwciała ANTI-FLAG, żywice i płytki do wychwytywania powinowactwa. [](https://www.sigmaaldrich.com) * * *  __Rysunek 1.__Sekwencja 3xFLAG®. Usunięcie N-końcowych znaczników 3xFLAG® jest możliwe przy użyciu enterokinazy, która rozszczepia sekwencję aminokwasów Asp-Asp-Asp-Asp-Lys na c-końcowym końcu znacznika.  __Rysunek 2.__Western blot oryginalnego FLAG i 3xFLAG®. Western blot oczyszczonego 3xFLAG®-BAP (bakteryjna fosfataza alkaliczna) i FLAG®-BAP przeniesionego na membranę nitrocelulozową. Detekcję przeprowadzono przy użyciu pierwotnego przeciwciała monoklonalnego ANTI-FLAG® M2, wtórnego przeciwciała anty-mysiego-HRP i substratu chemiluminescencyjnego ECL™. * * *   [](https://www.sigmaaldrich.com)  __Rysunek 3.__Czułość porównawcza 3xFLAG®. Każdy znacznik fuzyjny białka został sklonowany oddzielnie na C-końcu GST. Oczyszczone białka rozcieńczono od 1 ug do 0,01 ng i poddano analizie. Granicę wykrywalności każdego znacznika określono za pomocą analizy Western blot przy użyciu zalecanych rozcieńczeń każdego odpowiedniego przeciwciała pierwotnego i drugorzędowego koniugatu anty-mysiej IgG-HRP. Blot został opracowany przy użyciu ECL.   [](https://www.sigmaaldrich.com) ## Cechy wektorów CMV Nasze wektory ekspresyjne dla ssaków zawierają silny promotor CMV zapewniający wysoki poziom konstytutywnej ekspresji w komórkach ssaków. Silny region regulatorowy promotora ludzkiego wirusa cytomegalii (CMV) napędza konstytutywne poziomy ekspresji białka tak wysokie, jak 1 mG/L w komórkach COS. W przypadku słabszych linii komórkowych poziom białka wynosi zazwyczaj ~0,1 mG/L. Obecność genu replikacyjnego SV40 skutkuje wysokim poziomem replikacji DNA w komórkach COS dopuszczających replikację SV40. Wektory zawierające sekwencję lidera preprotrypsyny (PPT) kierują wydzielanie białek fuzyjnych FLAG do pożywki hodowlanej w celu oczyszczenia za pomocą przeciwciał ANTI-FLAG, żywic i płytek. ## Wektory do ekspresji przejściowej - Fuzje N-końcowe - Ekspresja cytoplazmatyczna - Sekwencja wiodąca PPPT do wydzielania - Konfiguracje z podwójnym znacznikiem - Usuwanie przez enterokinazę 3xFLAG® tag - pochodzenie pMB1 (pochodna pBR322) do replikacji w komórkach bakteryjnych - gen beta-laktamazy do selekcji oporności na ampicylinę u bakterii    __Rysunek 4.__Regiony MCS | | | | |-----------------------------------------------------------------|-----------------------------------------------------------------------------------------------|------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------| | Produkt Nr. | Opis | Region MCS | | [E7533](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e7533) | p3xFLAG®-CMV™-7.1 N-końcowy Met-3xFLAG® |  | | [E9908](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e9908) | p3xFLAG®-CMV™-8 N-końcowy 3xFLAG®. (wydzielany) |  | | [E9158](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e9158) | p3xFLAG®-*Myc*-CMV™-23 N-końcowy 3xFLAG®, C-końcowy c-*Myc* (podwójnie znakowany, wydzielany) |  | | [E9283](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e9283) | p3xFLAG®-*Myc*-CMV™-24 N-końcowy Met-3xFLAG®, C-końcowy c-*Myc* (podwójnie znakowany) |  | ## Wektory stabilnej ekspresji - Stabilna ekspresja z selekcją neomycyną (siarczan G 418) - Konfiguracje terminala N lub C - Ekspresja cytoplazmatyczna lub wydzielanie - Fuzje N- lub C-końcowe - Konfiguracje podwójnych znaczników - Ekspresja cytoplazmatyczna lub wydzielanie - Usuwanie przez enterokinazę N-końcowych znaczników 3xFLAG® - pochodzenie pMB1 (pochodna pBR322) do replikacji w komórkach bakteryjnych - gen beta-laktamazy do selekcji oporności bakterii na ampicylinę  __Rysunek 5.__Stabilny wektor ekspresji | | | | |-----------------------------------------------------------------|-----------------------------------------------------------------------------------------------|------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------| | Product No. | Opis | Region MCS | | [E9783](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e9783) | p3xFLAG®-CMV™-9 N-końcowy 3xFLAG® (wydzielany) |  | | [E7783](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e7783) | p3xFLAG®-CMV™-13 C-końcowy 3xFLAG® (wydzielany) |  | | [E7908](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e7908) | p3xFLAG®-CMV™-14 C-końcowy 3xFLAG® |  | | [E9408](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e9408) | p3xFLAG®-*myc*-CMV™-25 N-końcowy 3xFLAG®, C-końcowy c-*Myc* (podwójnie znakowany, wydzielany) |  | ## wektory stabilnej ekspresji BICEP™ - Najwyższa stabilna ekspresja - Neor gen jest translowany w sposób niezależny od czapeczki pod kontrolą EMCV IRES - Stabilna produkcja linii komórkowej bez obawy o utratę plazmidu - Poziom ekspresji przewyższa konkurencję 30-krotnie - Utrzymuje wysoki poziom ekspresji po wielu pasażach  __Rysunek 6.__Wektor stabilnej ekspresji Bicep | | | | |-----------------------------------------------------------------|--------------------------------------|------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------| | Nr produktu | Opis | Region MCS | | . | Opis | Region MCS | | [E0904](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/e0904) | pBICEP™-CMV™-2 N-końcowy Met-3xFLAG® |  | __Powiązane artykuły__ - [Wektory ekspresyjne FLAG® Tag dla bakterii i ssaków](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/vector-maps) - [Wprowadzenie do transfekcji komórek](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/transfection-reagents) - [Niebiesko-białe badania przesiewowe i protokoły selekcji kolonii](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/blue-white-screening) - [Protokoły transformacji bakterii](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/competent-cells) - [Endonukleazy restrykcyjne - nożyczki molekularne](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/restriction-endonucleases-the-molecular-scissors) - [Klonowanie interesujących genów do wektora plazmidowego](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/restriction-enzyme-cloning-manual-cloning) - [Transformacja bakterii E. coli za pomocą zmodyfikowanego plazmidu](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/restriction-enzyme-cloning-manual-transformation) - [System promotora T7](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/t7-promoter-system) - [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. An unknown error has occured.