CRMs cannabinoid: การทดสอบความถูกต้องและการตรวจสอบย้อนกลับ

Sarah Aijaz, Sr. R&D Manager, Reference Materials, Zoe Ruan, Principal Scientist, Sunil Badal, Senior Scientist, Uma Sreenivasan, Head of Reference Materials R&D

Merck

Article from Analytix Reporter - Issue 12

บทคัดย่อ

เอกสารอ้างอิงมีบทบาทสำคัญในเวิร์กโฟลว์ของกัญชา ผลลัพธ์ของคุณมีความแม่นยำเท่ากับเอกสารอ้างอิงของคุณเท่านั้น เราได้พัฒนาพอร์ตโฟลิโอของวัสดุอ้างอิงที่ผ่านการรับรอง cannabinoid (CRM) สำหรับใช้ในการสอบเทียบและวัดปริมาณการศึกษาความเหมาะสมของระบบและการคัดกรองเชิงคุณภาพ

บทนำ

ความสนใจในการวัดปริมาณ cannabinoid หรือการทดสอบความแรงของกัญชาและป่านยังคงเติบโตด้วยการขยายตัวทางการค้าของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารกัญชาและผลิตภัณฑ์เพื่อการพักผ่อนหย่อนใจ ในขณะที่รัฐส่วนใหญ่ของสหรัฐอเมริกามีกัญชาที่ถูกต้องตามกฎหมายสำหรับการใช้งานทางการแพทย์และหลายแห่งสำหรับการใช้งานเพื่อการพักผ่อนหย่อนใจแต่ก็ยังคงผิดกฎหมายจากรัฐบาลกลางและจัดเป็นสารกำหนดการ 1 การเติบโตของพืชกัญชาในสหรัฐอเมริกาได้รับการรับรองโดยรัฐบาลกลางโดยพระราชบัญญัติการปรับปรุงการเกษตรของสหรัฐอเมริกาปี 2018 หรือที่เรียกว่า 2018 ฟาร์มบิล กฎสุดท้ายของกระทรวงเกษตรของสหรัฐอเมริกา (USDA) สำหรับการผลิตป่านที่ตีพิมพ์ในวันที่ 19 มกราคม 2021 ต้องมีเนื้อหา tetrahydrocannabinol (THC) ทั้งหมดของวัสดุพืชบนพื้นฐานของน้ำหนักแห้งจะน้อยกว่า 0.3% สำหรับมันที่จะถูกกำหนดตามกฎหมายเป็นป่าน เนื้อหา THC ทั้งหมดจะถูก Δ มาเป็นผลรวมของ 9 THC และสารตั้งต้นทางชีวสังเคราะห์กรด Tetrahydrocannabinolic (THCA) เนื่องจาก THC เป็นผลิตภัณฑ์ย่อยสลายของ THCA หลังจาก decarboxylation ผู้ผลิตกัญชาต้องทิ้งล็อตทั้งหมดหากวัสดุพืชตัวอย่างมีมากกว่า 0.3% ของ THC ส่งผลให้เกิดผลกระทบทางการเงินที่อาจทำให้เสีย การผลิตวัสดุจากพืชที่มี THC รวมมากกว่า 1 เปอร์เซ็นต์ถูกกำหนดว่าเป็นการละเมิดโดยประมาทและอาจส่งผลให้เกิดการระงับหรือเพิกถอนใบอนุญาต USDA ของผู้ผลิตในการปลูกกัญชา ผลกระทบเหล่านี้เน้นถึงความสำคัญของการทดสอบวิเคราะห์ cannabinoid ที่ถูกต้อง อย่างไรก็ตามกฎสุดท้ายจะยอมรับความสำคัญของความแปรปรวนในการวิเคราะห์และต้องใช้ห้องปฏิบัติการทดสอบเพื่อรายงานการวัดความไม่แน่นอน (MU) ที่เกี่ยวข้องกับผลการทดสอบ THC เพื่อให้ " ระดับ THC ป่านที่ยอมรับได้ " สามารถพิจารณาสำหรับ MU¹

ในกฎสุดท้ายระหว่างกาล (IFR) บริการการตลาดการเกษตร (AGM) ขอข้อมูลเกี่ยวกับความต้องการที่อาจเกิดขึ้นสำหรับห้องปฏิบัติการทดสอบกัญชาเพื่อให้ได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO/IEC 17025 อย่างไรก็ตามความต้องการไม่ได้รวมอยู่ในกฎสุดท้ายเนื่องจากความคิดเห็นที่อ้างถึงความสามารถในห้องปฏิบัติการที่ไม่เพียงพอในปัจจุบันเพื่อรองรับการทดสอบป่านที่จำเป็นทั้งหมด ห้องปฏิบัติการจะต้องเป็นไปตามมาตรฐานบางอย่างของประสิทธิภาพการทำงานและใช้วิธีการทดสอบที่เหมาะสมสำหรับวัตถุประสงค์แต่ขณะนี้ไม่มีกระบวนการอนุมัติห้องปฏิบัติการของรัฐบาลกลางในสถานที่และความต้องการของรัฐแตกต่างกันอย่างกว้างขวาง วิธีการทดสอบเชิงวิเคราะห์ที่ได้รับอนุญาตคือ GC-FID หรือ HPLC ที่มีการตรวจจับ UV หรือ MS และวิธีการต้องเป็นไปตามข้อกำหนดประสิทธิภาพของวิธีการมาตรฐาน AOAC 2019 003² AOAC ได้เผยแพร่วิธีการอย่างเป็นทางการ 2018.11 สำหรับการวัดปริมาณของ cannabinoids ในวัสดุพืชที่ได้รับกระบวนการอนุมัติอย่างเข้มงวดและได้รับการยอมรับว่าเป็นวิธีการที่น่าเชื่อถือสูง³ United States Pharmacopeia (USP) ได้ระบุถึงความจำเป็นในการควบคุมคุณภาพที่เพิ่มขึ้นและการปฏิบัติที่สอดคล้องกันในการทดสอบกัญชาเพื่อวัตถุประสงค์ทางการแพทย์และได้เผยแพร่ข้อควรพิจารณาด้านคุณภาพที่สำคัญเพื่อช่วยในการแก้ไขช่องว่างเหล่านี้⁴ NIST เสนอโปรแกรมการประกันคุณภาพกัญชาคล้ายกับการทดสอบความสามารถเพื่อช่วยห้องปฏิบัติการประเมินความสามารถในการเปรียบเทียบและความสามารถในการทดสอบ⁵ แม้จะมีแนวทางและทรัพยากรเหล่านี้อยู่ในสถานที่อุตสาหกรรมได้รับทราบปัญหาต่อเนื่องของผลลัพธ์ที่ไม่สอดคล้องกันที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการที่แตกต่างกัน

The accuracy of a testing laboratory’s calibration standards is a critical factor that directly impacts the accuracy of the test results. ห้องปฏิบัติการต้องผลิตหรือซื้อวัตถุดิบหรือวัสดุอ้างอิงที่ใช้สารละลายที่เหมาะสมเพื่อใช้เป็นสารปรับเทียบมาตรฐาน ความพร้อมใช้งานของ cannabinoid Certified Reference Materials (CRM) ช่วยให้ห้องปฏิบัติการทดสอบสามารถทำการสอบเทียบภายในองค์กรที่มีประสิทธิภาพสามารถตรวจสอบย้อนกลับกับ CRMs ได้จึงช่วยให้มีความแม่นยำในการทดสอบและความสามารถในการทำซ้ำในระดับที่สูงขึ้น

ISO 17034 - เฉพาะสำหรับผู้ผลิตวัสดุอ้างอิงและ ISO/IEC 17025 - เฉพาะสำหรับห้องปฏิบัติการทดสอบให้มาตรฐานในการผลิตและการทดสอบ CRMs CRMs ได้รับการพิจารณาว่ามีความแม่นยำและความสามารถในการตรวจสอบย้อนกลับสูงสุดสำหรับหน่วยวัด SI สำหรับวัสดุทั้งหมดที่ผลิตโดยผู้ผลิตที่ได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO^6,7 มีการเลือกมาตรฐานอ้างอิงที่เกี่ยวข้องกับกัญชาที่นำเสนอโดย US Pfor Medical Use แต่ไม่มีมาตรฐานอ้างอิง cannabinoid ที่ผลิตโดยสถาบันมาตรวิทยาแห่งชาติใดๆ อย่างไรก็ตามโรงงานป่านและวัสดุอ้างอิงน้ำมันกำลังได้รับการพัฒนาโดย NIST⁵ 

เราได้ออกแบบและผลิตผลงานของ cannabinoid CRM STO สนับสนุนอุตสาหกรรมการทดสอบกัญชา ผลิตภัณฑ์เหล่านี้จะถูกนำเสนอเป็น analyte เดียวหรือหลายตัวละลายในสารเจือจางที่เหมาะสมและบรรจุใน ampoules ที่ปิดผนึกด้วยเปลวไฟสีเหลืองอำพัน มีการควบคุมการจัดการและกระบวนการที่เหมาะสมเพื่อให้มั่นใจถึงเสถียรภาพของ Analyte ในการจัดเก็บและการขนส่ง The concentration of each analyte is certified in accordance with ISO 17034 and ISO/IEC 17025. ความไม่แน่นอนของความเข้มข้นจะถูกคำนวณและรายงานพร้อมกับความเข้มข้นที่ได้รับการรับรองในใบรับรองการวิเคราะห์ที่มาพร้อมกัน (COA) ห้องปฏิบัติการทดสอบกัญชาควรเผยแพร่ค่านี้ของความไม่แน่นอนที่ไม่ขยายตัวในการคำนวณความไม่แน่นอนของวิธีการของตัวเอง

การผลิตและการรับรองของ Cannabinoid CRMs

วัตถุดิบ cannabinoid ที่ใช้ในการเตรียม Cerilliant^® CRMs ทั้งหมดถูกสังเคราะห์ภายในบริษัทและได้รับการรับรองโดยแผนการทดสอบที่กำหนดไว้ล่วงหน้าซึ่งออกแบบตามมาตรฐาน ISO 17034 และ ISO/IEC 17025 ตัวตนของ cannabinoid แต่ละตัวได้รับการตรวจสอบโดย ¹H-NMR และ chromatography ของเหลวความละเอียดสูง - สเปกโตรมิเตอร์มวล (LC-MS) ความแรงหรือสัดส่วนมวลของวัตถุดิบแต่ละชนิดได้รับมอบหมายให้เป็นปัจจัยความบริสุทธิ์ของมวล (MBPF) คำนวณโดยการลบมวลของสิ่งสกปรกออกจากมวลของ analyte โดยใช้ Equation 1 สิ่งสกปรกถูกกำหนดผ่านทางเทคนิคต่างๆที่ทำให้ผู้ที่มีความผันผวนอนินทรีย์และอินทรีย์ ปริมาณน้ำที่เหลืออยู่ถูกกำหนดโดยวิธีคูลูมิทรีของ Karl Fischer ในขณะที่สารระเหยตกค้างอื่นๆถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีก๊าซพื้นที่ว่างที่มีการตรวจจับไอออไนซ์เปลวไฟ (HS-GC-FID) เนื้อหาอนินทรีย์ที่เหลือถูกกำหนดโดยสารตกค้างในการจุดระเบิด (เถ้าซัลเฟต)

สิ่งสกปรกอินทรีย์ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงด้วยการตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลต (HPLC-UV) และรายงานว่าเป็นค่าเฉลี่ยของสองวิธี orthogonal การเลือกแบบตั้งฉากของทั้งสองวิธีถูกสร้างขึ้นผ่านขั้นตอนการเคลื่อนที่และการเคลื่อนที่ของโครมาโตกราฟีที่แตกต่างกัน GC-FID ถูกใช้เป็นเทคนิคยืนยันเพื่อการวิเคราะห์สิ่งสกปรกอินทรีย์ตามความเหมาะสม ในบางกรณี H - NMR เชิงปริมาณ 1 ถูกใช้เป็นเทคนิคยืนยันเพื่อ MBPF

สมการ 1 การคำนวณค่าความบริสุทธิ์ของมวล

โดยที่:

Wt% ตัวทำละลาย = เนื้อหาตัวทำละลายที่เหลืออยู่
ที่มีความไม่แน่นอน u ovi wt% H₂O = ปริมาณน้ำ
ที่เหลือที่มีความไม่แน่นอน u kf wt% อินทรี_{ยวัตถุ}
= เนื้อหาอนินทรีย์ที่เหลือที่มีความไม่แน่นอน u roi chromPurity = ความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีที่มีความไม่แน่นอน _UCP

มีการศึกษาสูตรเพื่อกำหนดเทคนิคการจัดการที่เหมาะสมสภาวะการจัดเก็บความเข้มข้นและสารเจือจางที่เหมาะสมสำหรับผลิตภัณฑ์ที่เสนอ การออกแบบ CRM ขั้นสุดท้ายจะขึ้นอยู่กับผลลัพธ์ของการศึกษาสูตร สารละลายแต่ละชนิดได้รับการเตรียมโดยการวัดแบบ gravimetric ของ analyte และ diluen twith ความเข้มข้น ที่กำหนดโดยสมการ 2 โดยใช้มวลที่วัดได้จริงการปรับความบริสุทธิ์ของ analyte (s) มวลที่วัดได้ของสารละลายและความหนาแน่นของสารเจือจางบริสุทธิ์ที่ 20°C สำหรับวัตถุดิบที่มีความหนืดเป็นแก้วหรือแข็งต่อการจัดการจะมีการแก้ปัญหาสต็อกและตรวจสอบด้วยการวิเคราะห์ก่อนการเจือจางครั้งสุดท้าย การวัดมวลทั้งหมดสามารถตรวจสอบย้อนกลับไปยังระบบหน่วยวัดสากล (SI) ผ่านยอดการวิเคราะห์ที่มีคุณสมบัติและปรับเทียบและได้รับการรายงานบนพื้นฐานทั่วไปสำหรับการชั่งน้ำหนักในอากาศ มวลของสารละลายแต่ละตัวถูกแปลงเป็นปริมาตรโดยการหารมวลด้วยความหนาแน่นของสารละลาย การวัดความหนาแน่นถูกสร้างขึ้นบนมิเตอร์วัดความหนาแน่นและสามารถตรวจสอบย้อนกลับกับมาตรฐานการสั่งซื้อที่สูงขึ้นผ่านการสอบเทียบ ความเข้มข้นที่เตรียมไว้ของสารวิเคราะห์แต่ละชนิดจะถูกรายงานเป็นหน่วยของมวลต่อปริมาตรโดยมีความไม่แน่นอนที่เพิ่มขึ้นและช่วงความเชื่อมั่นที่ระบุ สารละลายถูกจ่ายเข้าไปในหลอดแอมเบอร์ที่มีปริมาตรไม่น้อยกว่า 1 มล. และเปลวไฟที่ปิดผนึกภายใต้อาร์กอน

สมการ 2 การคำนวณความเข้มข้นที่ได้รับการรับรองสำหรับ CRM ที่เตรียมด้วยแม่พิมพ์

โดยที่:

C = ค่าอสังหาริมทรัพย์ที่ได้รับการรับรอง, ความเข้มข้นของ analyte ในสารละลายในหน่วยของมวล/ปริมาตร

_{MV + A} = มวลของ analyte + vial MV
= มวลของขวดเปล่า MF + s
= มวลของขวด + ตัวทำละลาย MF
= มวลของขวดเปล่า d
= ความหนาแน่นของสารละลาย p = การปรับความบริสุทธิ์, 100/ปัจจัยความบริสุทธิ์ของความสมดุลมวล (สำหรับ Analyte)
U = ความไม่แน่นอนในการวัดที่เพิ่มขึ้นแบบรวมที่กำหนดไว้

ความเข้มข้นความเป็นเนื้อเดียวกันและความบริสุทธิ์ของแต่ละ CRM ได้รับการตรวจสอบผ่านการทดสอบการวิเคราะห์ HPLC-UV หลอดแก้วที่ปิดผนึกถูกเลือกสำหรับการทดสอบจากทั่วทั้งชุดตามแผนการสุ่มตัวอย่างแบบแบ่งชั้นที่มีการถ่วงน้ำหนักแบบสุ่มโดยมีเปอร์เซ็นต์ของตัวอย่างที่ได้รับที่จุดกระบวนการสำคัญสูงกว่า ความเข้มข้นได้รับการตรวจสอบโดยการเปรียบเทียบกับโซลูชันการสอบเทียบ ที่เตรียมไว้อย่างอิสระซึ่งคำนวณเป็นค่าเฉลี่ยของการวิเคราะห์ตัวอย่างซ้ำ ภายในและระหว่างความเป็นเนื้อเดียวกันของหลอดแก้วได้รับการตรวจสอบผ่านค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ของการวิเคราะห์ตัวอย่างซ้ำ เกณฑ์การยอมรับความถูกต้องและความเป็นเนื้อเดียวกันรวมถึงค่าเผื่อสำหรับการมีส่วนร่วมที่ไม่แน่นอนจากการวัดการวิเคราะห์และความแปรปรวนจากการถ่ายโอนและการสูญเสียการระเหยในระหว่างการเตรียมตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์

ความเสถียรในการขนส่งระยะสั้นเกิดขึ้นจากการศึกษาความเครียดจากอุณหภูมิที่ทำที่ตู้แช่แข็ง (-25 ถึง -2°C), ตู้เย็น (2-8°C), อุณหภูมิห้อง (°C) และอุณหภูมิที่เครียด (40°C +/- 15-30°C) หนึ่งหลอดแก้วของแต่ละสารละลายมาตรฐานถูกถอดออกจากแต่ละสภาพการจัดเก็บณจุดเวลาที่ระบุและย้ายไปยังพื้นที่จัดเก็บของตู้แช่แข็งย่อยจนกว่าจะมีการวิเคราะห์ หลอดแก้วที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิเครียดได้รับการประเมินความบริสุทธิ์และ/หรือความเข้มข้นโดย HPLC-UV

ความเสถียรระยะยาวของ CRMs ได้รับการประเมินเป็นเวลา 14 เดือนหลังจากการผลิต ซึ่งทำได้โดยใช้การวิเคราะห์ HPLC-UV เพื่อศึกษาความบริสุทธิ์และความเข้มข้นของสารละลายแบบเรียลไทม์ การศึกษาเหล่านี้จะดำเนินการในภายหลังตลอดอายุการเก็บรักษาของผลิตภัณฑ์

ผลลัพธ์และการอภิปราย

ISO จะกำหนดวัสดุอ้างอิง (RM) เป็นวัสดุที่เป็นเนื้อเดียวกันมีความเสถียรและเหมาะกับการใช้งานการวัดที่ต้องการ CRM ต้องตรงตามข้อกำหนดเพิ่มเติมสำหรับ RMS วิธีการกำหนดลักษณะ CRM ต้องถูกต้องตามมาตรวิทยาและสามารถตรวจสอบย้อนกลับกับหน่วยวัดของค่าคุณสมบัติที่ได้รับการรับรองได้⁸ คู่มือ ISO ให้ความยืดหยุ่นแก่ผู้ผลิต CRM เกี่ยวกับวิธีที่พวกเขาตอบสนองความต้องการเหล่านี้

เป็นผลให้กระบวนการรับรองอาจแตกต่างกันไปในหมู่ผู้ผลิตตั้งแต่การกำหนดความแรงจากความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีที่เรียบง่ายไปจนถึงวิธีการ MBPF ที่ครอบคลุม ห้องปฏิบัติการทดสอบกัญชาจะต้องคำนึงถึงเรื่องนี้และทบทวนใบรับรองการวิเคราะห์ของ CRM (CoA) เพื่อให้แน่ใจว่าเหมาะกับการใช้งานที่ตั้งใจไว้ ตารางที่ 1 แสดงข้อผิดพลาดที่เป็นไปได้ที่เกี่ยวข้องกับการใช้ความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีเท่านั้น ความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีของ cannabinol คือ 99 0% แต่ความแรงที่กำหนดโดย MBPF ถึง 5%― เนื่องจากมีตัวทำละลายและน้ำตกค้าง 96%

นอกเหนือจากวิธีการรับรองแล้ว CoA ทุกเครื่องควรมีข้อมูลเพื่อสนับสนุนความเสถียรระหว่างการขนส่งและระยะยาวตลอดอายุการเก็บรักษาของผลิตภัณฑ์ รูปที่ 1 A แสดงตัวอย่างของการศึกษาความเครียดจากอุณหภูมิสำหรับสูตรต้นแบบที่ไม่เสถียรซึ่งเราเห็นการลดลงของความเข้มข้นด้วยการเพิ่มขึ้นของอุณหภูมิและเวลาในการจัดเก็บ การกำหนดผลิตภัณฑ์ C 218 ที่มีความเสถียรขั้นสุดท้าย ได้รับการพัฒนาผ่านการเลือกสารเจือจางการจัดการวัสดุและการควบคุมกระบวนการกำหนดสูตรที่เหมาะสม รูปที่ 1 B แสดงให้เห็นว่าความเข้มข้นของสารวิเคราะห์ทั้งหมดใน C-1 ยังคงมีความเสถียรที่อุณหภูมิการจัดเก็บหลายระดับสูงถึง 218 สัปดาห์โดยมีการสังเกตพบการเสื่อมสภาพเฉพาะในตัวอย่างที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 40°C เท่านั้นรูปที่ 1 C แสดงข้อมูลความเสถียรแบบเร่งความเร็วเดียวกันที่ลงจุดเป็นกราฟเส้นสำหรับ Analyte ที่เป็นตัวแทนสองตัวคือ CBDA และ THCA-A โดยมีความเสถียรแบบเรียลไทม์เพิ่มเติมแสดงได้สูงสุด 6 เดือน ประเมินความเสถียรแบบเรียลไทม์อย่างต่อเนื่องตลอดอายุการเก็บรักษาของผลิตภัณฑ์

รูปที่ 1 กราฟแท่งแสดงการศึกษาความเครียดอุณหภูมิของต้นแบบ(A) และการสรุป(B)ส่วนผสม cannabinoid ที่เป็นกรดกับบาร์แสดงการเปลี่ยนแปลงของความเข้มข้นที่เกี่ยวข้องกับเวลาที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิที่แตกต่างกัน: FZ: ตู้แช่แข็ง (-25 ถึง -10°C), R: ตู้เย็น (2-8°C), RT: อุณหภูมิห้อง (15-30°C) และ 40 (±2°C)°C กราฟด้านล่าง(C) แปลงการเปลี่ยนแปลงของความเข้มข้นในช่วงหกเดือนของ CBDA และ THCA-A ในแมว ไม่C 218 เก็บไว้ที่อุณหภูมิที่แตกต่างกัน

CRM CoA ควรรายงานวิธีการที่ใช้ในการระบุความไม่แน่นอนในการวัด รูปที่ 2 แสดงตัวอย่างแผนภาพก้างปลาสำหรับแหล่งที่มาของความไม่แน่นอนที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นที่ได้รับการรับรองของมาตรฐานโซลูชันที่เตรียมด้วยแม่พิมพ์ สมการที่ 3 แสดงการคำนวณการขยายพันธุ์ของความไม่แน่นอน วิธีการที่ใช้ในการคำนวณความไม่แน่นอนได้ถูกสร้างขึ้นตาม ISO 17034 และ ISO Guide 35 โดยการระบุตัวแปรกระบวนการผลิตและความเสี่ยงควบคู่ไปกับการวิเคราะห์ทางสถิติ ค่าความไม่แน่นอนจะแสดงเป็นค่าความไม่แน่นอนที่เพิ่มขึ้นในช่วงความเชื่อมั่น 95% โดยประมาณโดยใช้ค่าความครอบคลุมของ k = 2 มันรวมความไม่แน่นอนของปัจจัยความบริสุทธิ์, ความหนาแน่นของวัสดุ, ความสมดุล, ขั้นตอนการชั่งน้ำหนัก, ความเป็นเนื้อเดียวกันมาตรฐานการแก้ปัญหา, และความมั่นคง ความไม่แน่นอนของความเข้มข้นที่ได้รับการรับรองระบุไว้ใน CoA ในแง่ของมวลต่อปริมาตร

รูปที่ 2 แผนภาพก้างปลาของการมีส่วนร่วมของความไม่แน่นอนในการวัดสำหรับความเข้มข้นที่ได้รับการรับรอง

สมการ 3 การคำนวณความไม่แน่นอนสำหรับความเข้มข้นที่ได้รับการรับรองของ CRM รวมถึงเงื่อนไขความเป็นเนื้อเดียวกันและความมั่นคง

_ucert = ความไม่แน่นอนมาตรฐานของค่าคุณสมบัติที่ได้รับการรับรอง 
_uchar = ความไม่แน่นอนมาตรฐานของ การเตรียมมาตรฐานโซลูชันและรวมถึง UPF สำหรับการกำหนดลักษณะของปัจจัยความบริสุทธิ์ของมวล analyte (PF) um สำหรับการวัดมวลและ _ud สำหรับความหนาแน่นของตัวทำละลาย

_UBB = ความไม่แน่นอนมาตรฐานของความเป็นเนื้อเดียวกัน
ของขวดอุสตาบ = ความไม่แน่นอนมาตรฐานของความมั่นคง

การกำหนดค่าความไม่แน่นอนสำหรับ CRM รวมการศึกษาทางเทคนิคในทุกด้านของกระบวนการเตรียมมาตรฐานโซลูชันรวมถึงการวัดมวลการวัดความหนาแน่นการตรวจสอบความเป็นเนื้อเดียวกัน และความมั่นคง การศึกษาจะรวมการวัดซ้ำภายใต้เงื่อนไขกระบวนการที่แตกต่างกันและสร้างความไม่แน่นอนมาตรฐานสำหรับการวัดความหนาแน่นและมวล นอกจากนี้การศึกษายังมีการควบคุมกระบวนการที่ผ่านการตรวจสอบแล้วสำหรับการชั่งน้ำหนักและการจ่ายยา การมีส่วนร่วมในความไม่แน่นอนของความเป็นเนื้อเดียวกันจะได้รับการประเมินผ่านการวิเคราะห์ทางสถิติของข้อมูลความแม่นยำของความเข้มข้นสำหรับตัวอย่างที่ดึงที่จุดเวลาที่สำคัญในระหว่างการจ่ายล็อตที่กำหนด การมีส่วนร่วมในความไม่แน่นอนด้านเสถียรภาพจะได้รับการประเมินจากข้อมูลความคงตัวแบบอุณหภูมิสูงหรือแบบเรียลไทม์

CRM อาจใช้สำหรับการระบุปริมาณความเหมาะสมของระบบและการควบคุมวิธีการ รูปที่ 3 แสดงตัวอย่างของรูปแบบการเจือจาง CRM เพื่อให้ได้มาตรฐานที่มี cannabinoids สิบเจ็ด ซึ่งในเบื้องต้นสามารถใช้เป็นเครื่องมือคัดกรองเพื่อประเมินการมีอยู่หรือไม่มีของ cannabinoids ในตัวอย่าง เมื่อระบุ cannabinoids ที่น่าสนใจแล้วส่วนผสมสามารถเจือจางลงในเส้นโค้งสอบเทียบที่ครอบคลุมช่วงความเข้มข้นที่คาดไว้ของส่วนประกอบและใช้สำหรับการวัดปริมาณ หรือสามารถใช้ CRM แบบ analyte เดียวเพื่อเตรียมเส้นโค้งการปรับเทียบได้ ตัวอย่าง HPLC-UV chromatograms ของ 17 cannabinoid ผสมเตรียมจาก 5 CRMs (แมว Nos C-4, C-4, C-4, C-5, C-5, 218 154 และ C 219 171) และสารสกัดจากดอกตูมป่านจะถูกเปรียบเทียบใน รูปที่ 153 3 

รูปที่  4 แสดงให้เห็นถึงการใช้ Hemp Compliance Mix (ค. ศ. 217) ของเราเป็นการทดสอบความเหมาะสมของระบบเพื่อให้แน่ใจว่าประสิทธิภาพของวิธีการสำหรับการตรวจจับ THC ที่ระดับสูงสุดที่อนุญาต 0.3% สารละลายแยกที่มี cannabidiolquinone (CBDQ) 5 ไมโครกรัม/มล. µg งานโดยใช้วิธีเดียวกัน CBDQ I เป็นหนึ่งในการย่อยสลายออกซิเดชันของ CBD โครมาโตแกรมที่ซ้อนทับกันแสดงการแยก THC และ CBDQ พื้นฐานด้วยวิธีนี้ ถ้า cannabinoids o rimpurities อื่นๆ coelute กับ THC ข้อผิดพลาดในการวัดจะส่งผลให้ ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะตรวจสอบประสิทธิภาพของวิธีการอย่างสม่ำเสมอโดยใช้ส่วนผสมที่กำหนดขึ้นโดยเฉพาะสำหรับวัตถุประสงค์นี้เช่น illstrated ใน รูปที่ 4

รูปที่ 4 การซ้อนทับของโครมาโตแกรม HPLC-UV ของ 217 ส่วนผสมที่สอดคล้องกับกัญชา C-1 และตัวอย่างที่มี CBDQ แสดงความละเอียดระหว่าง THC และ CBDQ

สรุป

เราได้พัฒนา CRMs ของแต่ละ cannabinoids เช่นเดียวกับการผสม เหล่านี้สามารถใช้สำหรับโปรไฟล์ความแรงของทั้งกัญชาและกัญชา โดยเฉพาะอย่างยิ่งส่วนผสมการปฏิบัติตามข้อกำหนดของกัญชาของเราถูกกำหนดขึ้นเพื่อลดความซับซ้อนของการเตรียมมาตรฐานสำหรับการวิเคราะห์เนื้อหา THC ในป่าน การใช้การควบคุมกระบวนการที่เข้มงวดและการศึกษาสูตรตามที่อธิบายไว้ที่นี่เราได้คิดค้นส่วนผสม cannabinoid ที่มีเสถียรภาพ วัตถุดิบและกระบวนการบรรจุภัณฑ์ที่ได้รับการปรับปรุงของเราช่วยป้องกัน cannabinoids จากการเกิดออกซิเดชันจึงผลิต CRM ที่มีความสามารถในระยะยาว ด้วยความหลากหลายในวิธีการทดสอบและการรับรองในห้องปฏิบัติการการใช้ CRM ที่ถูกต้องและตรวจสอบได้และได้รับการรับรองอย่างถูกต้องเป็นสิ่งสำคัญ

ข้อมูลอ้างอิง

1. 2021. Establishment of a Domestic Hemp Production Program. [Internet]. 86 FR 5596, 5596-5691: Fed. Regist. Available from: https://www.federalregister.gov/d/2021-00967

2. AOAC SMPR^® 2019.003 Standard Method Performance Requirements (SMPRs) for Quantitation of Cannabinoids in Plant Materials of Hemp (Low THC Varieties Cannabis sp.). [Internet]. AOAC SMPR. Available from: https://www.aoac.org/wp-content/uploads/2019/10/SMPR-2019_003.pdf

3. AOAC 2018.11-2018 Quantitation of Cannabinoids in Cannabis Dried. AOAC Official Method.. [Internet]. AOAC Official Method of Analysis: Available from: http://www.aoacofficialmethod.org/index.php?main_page=product_info&products_id=3017

4. Sarma ND, Waye A, ElSohly MA, Brown PN, Elzinga S, Johnson HE, Marles RJ, Melanson JE, Russo E, Deyton L, et al. 2020. Cannabis Inflorescence for Medical Purposes: USP Considerations for Quality Attributes. J. Nat. Prod.. 83(4):1334-1351. https://doi.org/10.1021/acs.jnatprod.9b01200

5. NIST Tools for Cannabis Laboratory Quality Assurance. May 1, 2019:[cited 10 Oct 2021]. Available from: https://www.nist.gov/programs-projects/nist-tools-cannabis-laboratory-quality-assurance

6. ISO 17034:2016. General requirements for the competence of reference material producers. ISO. [Internet]. Available from: https://www.iso.org/standard/29357

7. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories. ISO. [Internet]. Available from: https://www.iso.org/standard/66912.html

8. ISO Guide 30:2015. Reference materials — Selected terms and definitions. ISO. [Internet]. Available from: https://www.iso.org/standard/46209.html