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Tampón de eliminación para Western blot a base de detergente

El stripping y la repetición del análisis de un Western blot permiten conservar la muestra y corregir o ajustar rápidamente la concentración de anticuerpos y el tiempo de incubación. Esta receta corresponde a una solución de stripping para Western blot que utiliza el tensioactivo dodecilsulfato de sodio (SDS) y el agente reductor β-mercaptoetanol (BME) para eliminar los anticuerpos y los reactivos de detección quimioluminiscentes o fluorescentes.

Esta calculadora permite preparar con precisión esta solución de eliminación para Western blot a base de detergente para cualquier volumen en mililitros. Introduce el volumen deseado, haz clic en el botón «CALCULAR» y la tabla se completará con las cantidades necesarias de cada componente.

Calculadora de recetas para soluciones de eliminación de Western blot a base de detergente

100 mL Recipe Desired Volume: mL    
20 mL of 10% SDS (71736)   mL of 10% SDS
12.5 mL of 0.5 M Tris-HCl pH 6.8 (FW 157.60)    mL of 0.5 M Tris HCl pH 6.8
0.8 mL of β-mercaptoethanol (63689)   mL of β-mercaptoethanol
Adjust final volume to 100 mL with Milli-Q® Water Adjust final volume to   mL with Milli-Q® Water
  Procedure
 
  1. In a fume hood, place the blot in detergent stripping buffer and incubate with agitation for 30 minutes at 50 °C.
  2. Place the blot in 1X PBS and agitate for 10 minutes. Repeat with fresh buffer.
  3. Optional: Repeat the initial detection protocol (omitting the primary antibody step) to make sure that the antibodies have been inactivated or removed from the membrane.
  4. Place the blot in fresh 1X PBS and agitate for 10 minutes.
  5. Proceed to the blocking step for the next round of immunodetection.
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