17-620

ChIPAb+ RNA-Pol II - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

from mouse

• Synonym(e): DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB1, RNA polymerase II
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702
• Clone: monoclonal
• Species reactivity: rat, Saccharomyces cerevisiae, mouse, human
• Application: ChIP, IF, IP
• Citations: 25

Eigenschaften

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• clone: monoclonal
• species reactivity: rat, Saccharomyces cerevisiae, mouse, human
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, immunofluorescence: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable
• isotype: IgG1
• NCBI accession no.: NP_000928
• UniProt accession no.: P24928
• shipped in: dry ice

Beschreibung

General description

210-220 kDa

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-RNA-Pol II-Set enthält den RNA-Pol II-Antikörper, den Negativkontrolle-Antikörper (Maus-IgG) und qPCR-Primer, die den humanen GAPDH-Promotor flankieren, und erzeugt ein 166-bp-Produkt. RNA-Pol II und die Negativkontrolle-Antikörper werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von RNA-Pol II-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

DNA-abhängige RNA-Polymerase katalysiert die Transkription von DNA zu RNA unter Verwendung der vier Ribonukleosidtriphosphate als Substrate. Die größte und katalytische Komponente von RNA-Polymerase II, die mRNA-Vorläufer und viele funktionell nichtkodierende RNA synthetisiert. Bildet zusammen mit der zweitgrößten Untereinheit das aktive Zentrum von Polymerase. Pol II ist die Kernkomponente des basalen RNA-Polymerase II-Transkriptionsapparats. Sie besteht aus mobilen Elementen, die sich relativ zueinander bewegen. RPB1 ist Teil des Kernelements mit einer großen zentralen Spalte, dem Clamp-Element, das sich bewegt, um die Spalte zu öffnen und schließen, und den Zangen, welche vermutlich die ankommende DNA-Matrize greifen sollen. Zu Beginn der Transkription wird eine Einzelstrang-DNA-Matrize des Promotors in dem aktiven Zentrum der Spalte von Pol II positioniert. Eine Brücken-Helix strömt aus RPB1 aus und überquert die Spalte nahe an der katalytischen Stelle. Es wird angenommen, dass sie die Translokation von Pol II fördert, indem sie als Sperrklinke dient, die den RNA-DNA-Hybrid durch das aktive Zentrum bewegt, indem sie in jedem Schritt der Nukleotidaddition von geraden zu gebogenen Konformationen wechselt. Während der Transkriptionselongation bewegt Pol II die Matrize, wenn das Transkript länger wird. Die Elongation wird durch den Phosphorylierungsstatus der C-terminalen Domäne (CTD) der größten Untereinheit von Pol II (RPB1), die als Bildungsplattform für Faktoren, die Transkriptionseinleitung, -elongation, -abbruch und mRNA-Verarbeitung regulieren, dient, beeinflusst. Sie dient als RNA-abhängige RNA-Polymerase, wenn sie mit dem kleinen Delta-Antigen von Hepatitis-D-Virus assoziiert ist, und dient sowohl als Replikat als auch Transkriptase für das zirkuläre Genom der Virus-RNA.

Immunogen

Der RNA-Pol II-Antikörper wurde gegen ein Peptid, das der C-terminalen Domäne von RNA-Pol II entspricht, entwickelt.

Application

Dieses Set aus ChIP-validiertem RNA-Pol II-Antikörper und Primer enthält den Antikörper in ChIP-Qualität und die spezifischen PCR-Kontrollprimer. Der ChIP-Antikörper wird für die Chromatin-Immunpräzipitation von RNA-Pol II eingesetzt.

Forschungs-Unterkategorie
Chromatin-Biologie

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

Western-Blot-Analyse:
3T3-Zellkernextrakt wurde durch Elektrophorese aufgelöst, auf Nitrocellulose übertragen und mit Anti-RNA-Polymerase II (0,1 μg/ml) geprüft. Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Maus-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert (siehe Abbildungen).

Biochem/physiol Actions

Basierend auf der Sequenzerhaltung wird eine Kreuzreaktion mit Ratte und Hefe erwartet.

Erkennt RNA-Pol II

Packaging

25 Assays je Set. ~1 μg je Chromatin-Immunpräzipitation

Physical form

Anti-RNA-Pol II (aufgereinigtes, monoklonales Maus-IgG1). Ein Fläschchen mit 25 μg aufgereinigtem Antikörper in 25 μl Volumen. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Maus-IgG. Ein Fläschchen mit 25 μg Maus-IgG in 25 μl Volumen. Bei -20 °C aufbewahren.

Kontrollprimer p21. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für eine Region des humanen GAPDH-Promotors. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG
CGA

Format: Aufgereinigt

Über Protein G aufgereinigt

Preparation Note

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.

Analysis Note

Kontrolle
Einschließlich Maus-IgG als Negativkontrolle-Antikörper und für humanes GAPDH spezifische Kontrollprimer.

Regelmäßig mittels Chromatin-Immunpräzipitation an HeLa-Zellkernextrakt beurteilt.

Legal Information

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• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• Was ist los?: WGK 1