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SCC111

R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie

Human

Synonym(e):

RSPO1-expressing 293T cells

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Über diesen Artikel

UNSPSC Code:
41106514
NACRES:
NA.81
eCl@ss:
32011203
Biological source:
human
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Produktname

R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie, The R-Spondin1-Expressing 293T cell line produces RSPO1, a critical protein used to establish 3D organoid cultures from stomach, small intestine, colon, pancreas, and liver sources.

biological source

human

Quality Segment

technique(s)

cell culture: suitable using | mammalian

shipped in

dry ice

storage temp.

-140 to -196°C

General description

3D-Organoidkultursysteme werden zunehmend als leistungsstarke Tools für Studien humaner Erkrankungen eingesetzt. Organoide stellen die gewebespezifische Nischenmikroumgebung besser dar. R-Spondin-1 (RSPO1) ist einer der am häufigsten eingesetzten Nischenfaktoren zum Kultivieren von 3D-Organoiden. Der erste veröffentlichte Bericht eines Organoidkultursystems, das Langzeitüberleben und mehrstufige Differenzierung von Darmstammzellen (ISC) fördern konnte und in Maus-Rspo1 als ein kritischer Faktor eingesetzt wurde. Seither wurde R-Spondin1 verwendet, um Organoidkulturen aus Magen, Dünndarm, Darm, Pankreas und Leber von Maus und Mensch zu etablieren .
RSPO1 ist ein Darmwachstumsfaktor, der als potenter Aktivator des Wnt/beta-Catenin-Signalwegs dient, indem er an Leucin-reiche Repeat–haltige G-Protein–gekoppelte Rezeptoren (LGR), die in Gewebestammzellen exprimiert werden, bindet. RSPO1 bindet auch an die transmembranen E3-Ubiquitinligasen RNF43 und ZNRF3, löst ihre Internalisierung und somit die Wnt-Signalisierung aus.

Die 293T-Zelllinie wird stabil transfiziert, um Maus-R-Spondin1-Protein zu exprimieren, das mit einem HA-Epitop-Tag am N-Terminus und einer Maus-IgG2α-Fc-Region am C-Terminus markiert ist. Die R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie kann zum Erzeugen von entweder aufgereinigtem Rspo1 oder Rspo1-konditionierten Medien eingesetzt werden. Die Fc-Region und HA-Tags ermöglichen eine einfache Aufreinigung und Charakterisierung. Die Zelllinie ist nicht die vom Kuo-Labor publizierte Zelllinie, sondern eine verwandte Zelllinie, die im selben Labor mit dem Referenzprotokoll entwickelt wurde.

Application

Dieses Produkt ist für den Verkauf vorgesehen und wird ausschließlich für interne nicht-kommerzielle Forschungszwecke gemäß der “Restricted Use Agreement” verkauft, wie in der Produktdokumentation dargelegt. Für Informationen zu anderen Zwecken wenden Sie sich bitte an licensing@emdmillipore.com.
Forschungskategorie
Zellkultur

Biochem/physiol Actions

Epithelzellen

Preparation Note

In Flüssigstickstoff aufbewahren. Die Zellen können nach dem ersten Auftauen für mindestens 10 Passagen kultiviert werden, ohne dass die Expression und Funktionalität der Zellmarker wesentlich beeinträchtigt wird.

Analysis Note

• Jedes Fläschchen enthält ≥1 x 10⁶ lebensfähige Zellen.
• Die Zellen werden mittels PCR negativ auf HPV-16, HPV-18, Hepatitis A, B, C, Herpesvirus Typ 6, 7, 8 sowie HIV-1- und HIV-2-Viren getestet.
• Die Zellen weisen keine Mykoplasmen-Kontamination auf.
• Jede Zellpartie wird mittels STR-Analyse genotypisiert, um die eindeutige Identität der Zelllinie zu verifizieren.

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SRP3292CB_12022001SAB3500046
293T-Zelllinie human NOTE: Both the cell line and DNA from the cell line may beavailable for this product. Please choose -1VL or VIAL for cells, or -DNA-5UGfor DNA, 12022001, human kidney, fetal. Small slightly rounded cells, dispersed growth

293T-Zelllinie human

description

The R-Spondin1-Expressing 293T cell line produces RSPO1, a critical protein used to establish 3D organoid cultures from stomach, small intestine, colon, pancreas, and liver sources.

description

recombinant, expressed in CHO cells, ≥95% (SDS-PAGE)

description

NOTE: Both the cell line and DNA from the cell line may beavailable for this product. Please choose -1VL or VIAL for cells, or -DNA-5UGfor DNA, 12022001, human kidney, fetal. Small slightly rounded cells, dispersed growth

description

affinity isolated antibody, buffered aqueous solution

technique(s)

cell culture: suitable using | mammalian

technique(s)

-

technique(s)

cell culture: suitable using | mammalian

technique(s)

immunohistochemistry: suitable, immunofluorescence: suitable, indirect ELISA: suitable, western blot: suitable

biological source

human

biological source

human

biological source

human kidney (fetal)

biological source

rabbit

shipped in

dry ice

shipped in

wet ice

shipped in

dry ice

shipped in

dry ice

storage temp.

-140 to -196°C

storage temp.

−20°C

storage temp.

−196°C

storage temp.

−20°C

Quality Level

100

Quality Level

-

Quality Level

-

Quality Level

100


Lagerklasse

10 - Combustible liquids

Flammpunkt (°F)

Not applicable

Flammpunkt (°C)

Not applicable



Hier finden Sie alle aktuellen Versionen:

Analysenzertifikate (COA)

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Questions

1–5 of 5 Questions  
  1. for our genetic engineering records, could you tell tell plasmid backbone was used for the stable transfection?

    1 answer
    1. This product was stably transfected with a proprietary mammalian expression vector. The available datasheet confirms the construct but does not disclose the plasmid backbone.

      https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/123/475/scc111dat-ms.pdf

      https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/422/301/scc111.pdf

      Helpful?

  2. How do you stain organoids with antibodies?

    1 answer
    1. Organoids can be stained with antibodies for immunocytochemical (ICC)/Immunohistochemical (IHC) analysis using either whole-mount or paraffin embedding/sectioning techniques. It is critical to use antibodies prequalified for organoid analysis.

      Helpful?

  3. How are organoids cultured?

    1 answer
    1. Once isolated, organoids are cultured in specialized media embedded in a rich extracellular matrix (ECM) basement membrane extract hydrogel such as Growth Factor Reduced Matrigel. Media is replenished every other day and cells are passaged once per week (7-12 days) before cells become too large or necrotic. Cells can be passaged in either small clump fragments or as single cells using mechanical dissociation/enzyme-free passaging reagents. Depending on organoid type and confluency, split ratios of roughly 1:3-1:4 can be used when passaging organoids. For sensitive organoid types, ROCKi (Y27632) (SCM075) can be added during passaging to help in promoting cell viability.

      Helpful?

  4. How Do you Extract RNA/DNA from Organoids in Cultured in Matrigel?

    1 answer
    1. Traditional DNA/RNA isolation kits can be used to prepare genomic material for sequencing (RNA-seq, scRNA-seq, WGS, CHIP-seq etc). For some applications with large organoids, tissue specific DNA/RNA extraction kits are recommended. TRI Reagent (T9424) can be added to the dissociated organoids before RNA extraction and can be stored at -80 °C until future use.

      Helpful?

  5. What is the selection marker that is used in your RS Spondin expressing 293 cells. Is it neomycin resistance? What antibiotic should be used for selection pressure? Geneticin/G418?

    1 answer
    1. The cell line is selected by zeocin. It is not necessary to add zeocin to culture medium as the cell line is stable.

      Helpful?

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