R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie, The R-Spondin1-Expressing 293T cell line produces RSPO1, a critical protein used to establish 3D organoid cultures from stomach, small intestine, colon, pancreas, and liver sources.
3D-Organoidkultursysteme werden zunehmend als leistungsstarke Tools für Studien humaner Erkrankungen eingesetzt. Organoide stellen die gewebespezifische Nischenmikroumgebung besser dar. R-Spondin-1 (RSPO1) ist einer der am häufigsten eingesetzten Nischenfaktoren zum Kultivieren von 3D-Organoiden. Der erste veröffentlichte Bericht eines Organoidkultursystems, das Langzeitüberleben und mehrstufige Differenzierung von Darmstammzellen (ISC) fördern konnte und in Maus-Rspo1 als ein kritischer Faktor eingesetzt wurde. Seither wurde R-Spondin1 verwendet, um Organoidkulturen aus Magen, Dünndarm, Darm, Pankreas und Leber von Maus und Mensch zu etablieren.
RSPO1 ist ein Darmwachstumsfaktor, der als potenter Aktivator des Wnt/beta-Catenin-Signalwegs dient, indem er an Leucin-reiche Repeat–haltige G-Protein–gekoppelte Rezeptoren (LGR), die in Gewebestammzellen exprimiert werden, bindet. RSPO1 bindet auch an die transmembranen E3-Ubiquitinligasen RNF43 und ZNRF3, löst ihre Internalisierung und somit die Wnt-Signalisierung aus.
Die 293T-Zelllinie wird stabil transfiziert, um Maus-R-Spondin1-Protein zu exprimieren, das mit einem HA-Epitop-Tag am N-Terminus und einer Maus-IgG2α-Fc-Region am C-Terminus markiert ist. Die R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie kann zum Erzeugen von entweder aufgereinigtem Rspo1 oder Rspo1-konditionierten Medien eingesetzt werden. Die Fc-Region und HA-Tags ermöglichen eine einfache Aufreinigung und Charakterisierung. Die Zelllinie ist nicht die vom Kuo-Labor publizierte Zelllinie, sondern eine verwandte Zelllinie, die im selben Labor mit dem Referenzprotokoll entwickelt wurde.
Application
Dieses Produkt ist für den Verkauf vorgesehen und wird ausschließlich für interne nicht-kommerzielle Forschungszwecke gemäß der “Restricted Use Agreement” verkauft, wie in der Produktdokumentation dargelegt. Für Informationen zu anderen Zwecken wenden Sie sich bitte an licensing@emdmillipore.com.
Forschungskategorie Zellkultur
Biochem/physiol Actions
Epithelzellen
Preparation Note
In Flüssigstickstoff aufbewahren. Die Zellen können nach dem ersten Auftauen für mindestens 10 Passagen kultiviert werden, ohne dass die Expression und Funktionalität der Zellmarker wesentlich beeinträchtigt wird.
Analysis Note
• Jedes Fläschchen enthält ≥1 x 10⁶ lebensfähige Zellen. • Die Zellen werden mittels PCR negativ auf HPV-16, HPV-18, Hepatitis A, B, C, Herpesvirus Typ 6, 7, 8 sowie HIV-1- und HIV-2-Viren getestet. • Die Zellen weisen keine Mykoplasmen-Kontamination auf. • Jede Zellpartie wird mittels STR-Analyse genotypisiert, um die eindeutige Identität der Zelllinie zu verifizieren.
The R-Spondin1-Expressing 293T cell line produces RSPO1, a critical protein used to establish 3D organoid cultures from stomach, small intestine, colon, pancreas, and liver sources.
description
recombinant, expressed in CHO cells, ≥95% (SDS-PAGE)
description
NOTE: Both the cell line and DNA from the cell line may beavailable for this product. Please choose -1VL or VIAL for cells, or -DNA-5UGfor DNA, 12022001, human kidney, fetal. Small slightly rounded cells, dispersed growth
for our genetic engineering records, could you tell tell plasmid backbone was used for the stable transfection?
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Technical Support
·4 months ago
This product was stably transfected with a proprietary mammalian expression vector. The available datasheet confirms the construct but does not disclose the plasmid backbone.
Organoids can be stained with antibodies for immunocytochemical (ICC)/Immunohistochemical (IHC) analysis using either whole-mount or paraffin embedding/sectioning techniques. It is critical to use antibodies prequalified for organoid analysis.
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Anonymous
·2 years ago
How are organoids cultured?
1 answer
Technical Support
·2 years ago
Once isolated, organoids are cultured in specialized media embedded in a rich extracellular matrix (ECM) basement membrane extract hydrogel such as Growth Factor Reduced Matrigel. Media is replenished every other day and cells are passaged once per week (7-12 days) before cells become too large or necrotic. Cells can be passaged in either small clump fragments or as single cells using mechanical dissociation/enzyme-free passaging reagents. Depending on organoid type and confluency, split ratios of roughly 1:3-1:4 can be used when passaging organoids. For sensitive organoid types, ROCKi (Y27632) (SCM075) can be added during passaging to help in promoting cell viability.
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Anonymous
·2 years ago
How Do you Extract RNA/DNA from Organoids in Cultured in Matrigel?
1 answer
Technical Support
·2 years ago
Traditional DNA/RNA isolation kits can be used to prepare genomic material for sequencing (RNA-seq, scRNA-seq, WGS, CHIP-seq etc). For some applications with large organoids, tissue specific DNA/RNA extraction kits are recommended. TRI Reagent (T9424) can be added to the dissociated organoids before RNA extraction and can be stored at -80 °C until future use.
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·4 years ago
What is the selection marker that is used in your RS Spondin expressing 293 cells. Is it neomycin resistance? What antibiotic should be used for selection pressure? Geneticin/G418?
1 answer
Technical Support
·3 years ago
The cell line is selected by zeocin. It is not necessary to add zeocin to culture medium as the cell line is stable.