E64-RO

E-64

N-[N-(L-3-Trans-carboxirane-2-carbonyl)-L-leucyl]-agmatine

• Synonym(e): trans-Epoxysuccinyl-L-leucylamido(4-guanidino)butan, L-trans-3-Carboxyoxiran-2-carbonyl-L-leucylagmatin, N-(trans-Epoxysuccinyl)-L-leucin-4-guanidinobutylamid
• Empirische Formel (Hill-System): C₁₅H₂₇N₅O₅
• CAS-Nummer: 66701-25-5
• Molekulargewicht: 357.41
• PubChem Substance ID: 329798998
• UNSPSC Code: 12352202
• Beilstein/REAXYS Number: 1405664
• MDL number: MFCD00080261
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• assay: >95% (HPLC)
• form: powder
• mol wt: M_r 357.4
• packaging: pkg of 10 mg (10874523001), pkg of 25 mg (11585681001)
• manufacturer/tradename: Roche
• pH range: 2-10
• solubility: ethanol: water (1:1): soluble 20 mg/mL
• storage temp.: 2-8°C
• SMILES string: CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1O[C@H]1C(O)=O)C(=O)NCCCCNC(N)=N
• InChI: 1S/C15H27N5O5/c1-8(2)7-9(20-13(22)10-11(25-10)14(23)24)12(21)18-5-3-4-6-19-15(16)17/h8-11H,3-7H2,1-2H3,(H,18,21)(H,20,22)(H,23,24)(H4,16,17,19)/t9-,10+,11+/m0/s1
• InChI key: LTLYEAJONXGNFG-HBNTYKKESA-N

Beschreibung

Application

E-64 is used for the inhibition of papain and other cysteine proteases such as cathepsin B and L, bromelain, and ficin during isolation and purification of proteins and enzymes.
It has been used in the affinity chromatography for the purification of hemoglobin receptors.
The inhibition of thiol proteases by E-64 appears to be of a non-competitive nature between the SH components. The inhibition is also irreversible, and is altered after gel filtration (Sephadex column) or dialysis after incubation of papain with E-64. The enzyme and inhibitor combine in an equimolar ratio.

E-64 ist ein wirkungsvoller Ligand zur Affinitätsaufreinigung von Cysteinproteasen. Durch Kopplung mit einer thiolierten Affinitätsmatrix ist die Bindung nicht mehr irreversibel, die Spezifität wird aber beibehalten.

Biochem/physiol Actions

E-64 ist ein irreversibler, wirksamer und hochspezifischer Cysteinproteaseninhibitor. E-64 reagiert nicht mit der funktionellen Thiol-Gruppe der Nichtproteaseenzyme wie z. B. L-Lactatdehydrogenase oder Kreatinkinase. Im Gegensatz zu anderen Cysteinproteaseninhibitoren wie beispielsweise Leupeptin und Antipain werden Serinproteasen (außer Trypsin) nicht von E-64 gehemmt. Die Trans-Epoxysuccinyl-Gruppe (aktive Gruppe) von E-64 bindet irreversibel an die aktive Thiol-Gruppe von vielen Cysteinproteasen wie beispielsweise Papain, Actinidase und Cathepsin B, H und L, um eine Thioether-Bindung einzugehen. E-64 ist ein sehr nützlicher Cysteinproteaseninhibitor für die Anwendung in In-vivo-Studien, weil es eine spezifische Hemmung, eine gute Zell- und Gewebepermeabilität und eine geringe Toxizität aufweist.

Effektiver irreversibler Hemmer von Cysteinproteasen, der sich nicht auf Cysteinrückstände in anderen Enzymen auswirkt oder mit Thiolen mit geringem Molekulargewicht wie z. B. Calpain und Cathepsin B reagiert. Effektive Konzentration 1–10 μM.

The thiol protease inhibitor E-64 specifically inhibits papain and other cysteine proteases such as cathepsin B and L, bromelain, and ficin. Cathepsin A and D are not inhibited. L-lactate dehydrogenase from porcine heart is not inhibited, although the enzyme contains a functional thiol group.

Preparation Note

E-64 ist in Wasser löslich. Eine Lösung von 20 mg/mL kann in Wasser zubereitet werden (Erwärmung evtl. erforderlich). Eine empfohlene Stammlösung ist eine wässrige 1-mM-Lösung. Die effektive Konzentration für die Verwendung als Proteasehemmer beträgt 1 bis 10 μM. Wässrige Stammlösungen sind bei -20 °C monatelang stabil. Verdünnte Lösungen sind bei einem neutralen pH-Wert tagelang stabil. E-64 ist von pH 2 bis 10 stabil, in Ammoniak oder HCl aber unstabil. E-64 ist auch in DMSO löslich; eine 10-mM-Lösung kann in trockenem DMSO hergestellt und bei -20 °C aufbewahrt werden. Darauffolgende Verdünnungen erfolgten in Kulturmedium. Injektionslösungen werden durch Auflösen von E-64 in 0,9 % Natriumchlorid oder in einer Mindestmenge an gesättigtem Natriumbicarbonat mit anschließender Verdünnung mit 0,9% Natriumchlorid zubereitet (nach Anpassen des pH-Werts auf 7,0 mithilfe von Essigsäure).

Working concentration: 0.5 to 1.0 μg/ml (1.4 to 28.0 μM)
Working solution: Soluble to 20 mg/ml (stock solution) in a 1:1 (v/v) mixture of ethanol and water (vortexing or slight warming in water bath (40 °C) may facilitate dissolution). Also soluble in a neutral water/methanol solution, in water, methanol, acetic acid, pyridine and DMSO. Sparingly soluble in ethanol and propanol. Insoluble in acetone, chloroform, ethyl ether and benzene.
Storage conditions (working solution): -15 to -25 °C
Solutions are stable for one month when stored in aliquots at -15 to -25 °C.

Soluble to 20 mg/ml in a 1:1 (v/v) mixture of ethanol and water. Solutions are stable for one month when stored in aliquots at -15 to -25 °C.

Other Notes

For life science research only. Not for use in diagnostic procedures.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Warning
• hcodes: H371
• pcodes: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Hazard Classifications: STOT SE 2
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 2
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