FSTMPMMRO

FastStart TaqMan^® Probe Master

sufficient for 100 reactions, sufficient for 500 reactions, sufficient for 2000 reactions, suitable for qPCR, suitable for RT-qPCR

• NACRES: NA.55
• UNSPSC Code: 41106300

Eigenschaften

• usage: sufficient for 100 reactions, sufficient for 2000 reactions, sufficient for 500 reactions
• feature: dNTPs included: no, hotstart
• manufacturer/tradename: Roche
• packaging: pkg of 100 x 50 μL reactions (04673409001), pkg of 2000 x 50 μL reactions (04673433001), pkg of 500 x 50 μL reactions (04673417001)
• technique(s): RT-qPCR: suitable, qPCR: suitable, whole genome amplification: suitable
• input: purified DNA
• detection method: probe-based

Beschreibung

General description

FastStart TaqMan^® Probe Master ist ein gebrauchsfertiges Heißstart-Reaktionsgemisch ohne ROX für qPCR (quantitative Polymerase-Kettenreaktion) und RT-qPCR (Reverse-Transkriptase-qPCR) auf Echtzeit-PCR-Systemen mit Ausnahme der LightCycler^®-Instrumente. Es ist ein 2-fach konzentrierter Mastermix, der alle Reagenzien enthält (außer Primer, Sonde und Template). Dieser Mastermix vereinfacht die Vorbereitung von Reaktionen für die DNA-Detektion und -Analyse. Er ermöglicht eine empfindliche Detektion und Quantifizierung definierter DNA-Sequenzen.
Heißstart-Protokolle verbessern die Spezifität und Ausbeute der PCR erheblich. Hitzelabile Blockiergruppen auf einigen der Aminosäurereste der FastStart Taq-DNA-Polymerase inaktivieren das modifizierte Enzym bei Raumtemperatur. Daher findet in der Zeit, in der Primer unspezifisch binden können, keine Elongation statt. Die FastStart Taq-DNA-Polymerase wird durch Entfernung der Blockiergruppen bei hohen Temperaturen (z. B. einem Vorinkubationsschritt bei +95 °C) aktiviert.
Dieser FastStart TaqMan^® Probe Master kann zur Amplifikation und Detektion jedes DNA- oder cDNA-Targets, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets, verwendet werden. Allerdings wäre es nötig, das Detektionsprotokoll an die Reaktionsbedingungen des jeweils verwendeten Echtzeit-PCR-Geräts anzupassen und für jedes Target designspezifische Hydrolysesonden und Primer zu nutzen.
Durch Kombination dieses Mastermixes mit unserem Transcriptor First Strand cDNA-Synthesekit erzielen Sie ausgezeichnete Ergebnisse bei der zweistufigen qRT-PCR.

Heißstart-Protokolle verbessern die Spezifität, Sensitivität und Ausbeute der PCR erheblich. Hitzelabile Blockiergruppen auf einigen der Aminosäurereste der FastStart Taq-DNA-Polymerase inaktivieren das modifizierte Enzym bei Raumtemperatur. Daher findet während der Zeit, in der Primer unspezifisch binden können, keine Verlängerung statt. Die FastStart Taq-DNA-Polymerase wird durch Entfernung der Blockiergruppen bei hohen Temperaturen (z. B. einem Vorinkubationsschritt bei +95 °C) aktiviert.

Application

FastStart TaqMan^® Probe Master wurde verwendet in:

• quantitativen Echtzeit-DNA-Detektionsassays
• qPCR und der zweistufigen Umkehrtranskription (RT)-qPCR
• im Detektionsformat von Hydrolysesonden

Features and Benefits

• Steigerung der qPCR-Sensitivität und -Spezifität.

Erzeugung niedrigerer Grenzwerte (C_t) mit dem Heißstart-Enzym FastStart Taq DNA Polymerase und den im Master-Mix enthaltenen ultrareinen Nukleotiden.

• Mit einem sondenbasierten Assay verwendbar:

Erreichen empfindlicher, spezifischer Ergebnisse in Assays mit den Universal ProbeLibrary-Sonden oder jeder anderen Hydrolyse-Sonde.

• Amplifikation und Detektion zahlreicher DNA- und cDNA-Targets:

Amplifiziert Fragmente bis zu einer Länge von 500 Basenpaaren, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets.

• Funktioniert mit allen Echtzeit-PCR-Geräten mit Ausnahme der LightCycler^®-Instrumente:

Erhältlich in zwei Formulierungen – eine Version mit dem ROX Referenzfarbstoff und eine ohne ROX.

• Visualisierung von Amplifikationsprodukten auf Agarosegelen.

• Verwenden von automatisierten Pipettierstationen zum Vorbereiten von qPCR-Reaktionen.

Verwendung eines Master-Mix, der bei Raumtemperatur während längerer Reaktionseinrichtzeiten stabil ist.

• Keine Verschleppung von Kontaminationen.

Das Gemisch enthält dUTP und kann so mit Uracil-DNA-Glycosylase verwendet werden, um falschpositive Ergebnisse aufgrund einer Verschleppung von Kontaminationen (z. B. Kontamination mit amplifizierter DNA) auszuschließen.

Analysis Note

Funktionstest: Jede Charge wird unter Anwendung von drei Templates – einem GC-reichen, einem AT-reichen und einem langen (etwa 440 Basenpaare) Template – einer qPCR-Leistungsprüfung unterzogen.

Other Notes

qPCR-Targets
Grundsätzlich kann FastStart TaqMan^® Probe Master zur Amplifikation und Detektion jedes DNA- oder cDNA-Targets, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets, verwendet werden. Allerdings wäre für jedes Target erforderlich:

• Anpassung des Detektionsprotokolls an die Reaktionsbedingungen des Echtzeit-PCR-Geräts, und
• designspezifische PCR-Primer und Hydrolysesonden für das Target.

Allgemeine Empfehlungen entnehmen Sie dem Bedienerhandbuch Ihres Echtzeit-PCR-Geräts.
Zwei Versionen erhältlich
Der Mastermix ist in zwei Versionen erhältlich – eine Version mit dem ROX-Referenzfarbstoff und eine ohne ROX.
Vermeiden von Verschleppungskontaminationen
Dieses Master enthält dUTP, das in PCR-Produkte integriert wird und so dazu beiträgt, falsch positive Ergebnisse infolge von Verschleppungskontaminationen zu verhindern. In nachfolgenden PCRs können Sie Uracil-DNA-Glycosylase hinzufügen, um jegliche Uracil-haltigen Verschleppungskontaminationen (Amplifikationsprodukte aus früheren PCRs) abzubauen.
qRT-PCR
Bei Kombination dieses Mastermixes mit unserem Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit können Sie eine zweistufige qRT-PCR durchführen. Das Kit erzielt hervorragende Ergebnisse und arbeitet effizient mit allen Echtzeit-PCR-Geräten.

FastStart TaqMan^® Probe Master, 2-fach konzentrierter Mastermix aus FastStart Taq-DNA-Polymerase, Reaktionspuffer, Nukleotiden (dATP, dCTP, dGTP, dUTP).

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Legal Information

LightCycler is a registered trademark of Roche

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• Was ist los?: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash