UDGHL-RO

Uracil-DNA-Glykosylase, hitzelabil

recombinant from marine bacterium BMTU 3346

• Synonym(e): PCR, UDG
• UNSPSC Code: 41106300
• EG-Nummer: 3.2.2.15 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Biological source: bacterial (marine bacterium BMTU 3346)
• Recombinant: expressed in E. coli
• Concentration: 1000 U/mL

Eigenschaften

• biological source: bacterial (marine bacterium BMTU 3346)
• recombinant: expressed in E. coli
• form: solution
• packaging: pkg of 100 U (11775367001), pkg of 500 U (11775375001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: 1000 U/mL
• technique(s): activity assay: suitable
• color: colorless
• optimum pH: 8.3-8.9
• solubility: water: soluble
• suitability: suitable for enzyme test
• application(s): life science and biopharma
• foreign activity: DNA decontamination:, present ( >= 10 e5 copies ), RNases with MS- II- RNA ≤10 units, none detected, Unspec.nucleases w. lambda-DNA 20 units, none detected, Unspec.nucleases w.M13mp9ss-DNA ≤20 units, none detected, Unspec.nucleases w.pBR 322-DNA ≤20 units, none detected
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Uracil-DNA-Glycosylase, hitzelabil, enthält das gleichnamige Enzym aus dem Meeresbakterium BMTU 3346. Wie auch die UNG aus E.coli hydrolysiert sie Uracil-glycosidische Bindungen in einzel- oder doppelsträngiger DNA, exzidiert Uracil und schafft alkaliempfindliche abasische Stellen in der DNA. Diese abasischen Stellen können mit Endonuklease, Hitze oder alkalischer Behandlung hydrolysiert werden. Je nach Art der Präparation der DNA kann Uracil-DNA-Glycosylase zum Erreichen einer allgemeinen, ortsspezifischen oder strangspezifischen U-DNA-Spaltung genutzt werden. Dieses Enzym weist eine geringere Thermostabilität auf und ist daher einfacher zu deaktivieren.

Enzymcharakteristika
Das BMTU 3346-Enzym wird schneller inaktiviert (2 Minuten bei +95°C) als das entsprechende Enzym aus E. coli (10 Minuten bei +95 °C). Es wird auch berichtet, dass UNG aus E. coli zum Teil aktiv bleibt, was zu einem Abbau des dU-enthaltenden PCR-Produkts führt. Im Gegensatz dazu baut die hitzelabile UNG innerhalb von mindestens einigen Stunden Inkubationszeit bei +2 bis +8°C dU-PCR-Produkte nicht ab. Aus diesem Grund ist es nicht erforderlich, das PCR-Produkt unmittelbar nach der Amplifikation einzufrieren oder das Reaktionsgemisch bei -70 °C zu halten.

Application

Uracil-DNA-Glycosylase kann dazu genutzt werden, DNA an jeder Stelle zu spalten, an der ein Desoxyuridylat-Rückstand eingebaut ist. Aufgrund der Hitzelabilität der Uracil-DNA-Glycosylase, hitzelabil, ist die Hauptanwendung dieses Enzyms die Vermeidung einer Kontaminationsübertragung in der PCR. Im Gegensatz zum Enzym aus E.coli ist bei diesem UNG-Ansatz kein Einfrieren des PCR-Produkts unmittelbar nach der Amplifikation und auch kein Halten des Reaktionsgemischs auf +70 °C erforderlich.

Wichtiger Hinweis: Für hochsensible Techniken wie Echtzeit-PCR empfehlen wir unsere LightCycler^® Uracil-N-Glycosylase, die für diesen Anwendungsbereich optimiert ist.

Biochem/physiol Actions

• Uracil-DNA-Glycosylase hydrolysiert Uracil-glycosidische Bindungen an U-DNA-Stellen in einzel- oder doppelsträngiger DNA, exzidiert Uracil und schafft alkaliempfindliche abasische Stellen in der DNA.
• Das Enzym ist sowohl in einzel- als auch doppelsträngiger DNA aktiv.
• Uracil-DNA-Glycosylase ist gegenüber RNA und nativer, Uracil-freier DNA inaktiv.
• Da die Uracil-DNA-Glycosylase keine Metallionen benötigt, ist sie in Gegenwart von EDTA vollständig aktiv.

Hitzeinaktivierung: 95 °C für 2 min

Features and Benefits

• Vermeidung einer Kontaminationsübertragung in die PCR.
• Erhöhung der Effizienz von zielgerichteten Mutageneseverfahren.
• Markierung von Oligonukleotid-Sonden.
• Durchführung einer schnelleren Inaktivierung als durch das entsprechende Enzym aus E. coli aufgrund der geringeren Thermostabilität des Enzyms.
• Bei +2 bis +8 °C kein Abbau von dU-PCR-Produkten innerhalb von mindestens einigen Stunden nach der Inkubation.

Inhalt
Das Enzym wird als 1 U/μl-Lösung in Lagerpuffer geliefert.

Analysis Note

Funktionstest: Die Aktivität zur Vorbeugung von Verschleppung wird durch die Zugabe von ca. 105 dU mit Templates vor der Amplifikationsreaktion getestet. Nach der Behandlung mit der UNG wurden keine Amplifikationsprodukte nachgewiesen.
Gemäß den derzeitigen Qualitätskontrollverfahren enthält das Enzym keine kontaminierenden Exo- oder Endonukleasen und weist keine RNase-Aktivität auf.

Other Notes

Eine Einheit ist definiert als die Menge Uracil-DNA-Glycosylase, die erforderlich ist, um 1 μg gereinigte, einsträngige Uracil-haltige DNA (Bakteriophage M13, in E. coli CJ236 dut-ung- gewachsen) bei +37 °C in 60 Minuten vollständig abzubauen.
Eine Lindahl-Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die zur Abgabe von 1 Mol Uracil bei +37 °C in 1 Minute erforderlich ist. Eine Lindahl-Einheit ist, basierend auf unserer Einheitendefinition, mit 520.000 Einheiten vergleichbar.

Volumenaktivität: 1 U/μl

Für den allgemeinen Laborgebrauch.

Legal Information

LightCycler is a registered trademark of Roche

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash
• Was ist los?: WGK 1