E6909

ECM-Gel aus Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma

growth-factor reduced, without phenol red, liquid, BioReagent, suitable for cell culture

• Synonym(e): GFR Basement Membrane Extract (BME)
• UNSPSC Code: 12352207
• NACRES: NA.75
• MDL number: MFCD00283131

Eigenschaften

• Quality Segment: 200
• product line: BioReagent
• form: liquid
• concentration: 7-9 mg/mL
• technique(s): cell culture | mammalian: suitable
• UniProt accession no.: P02468, P02469, P10493, P19137, P43407, Q05793, Q61001, Q61092, Q61789
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −20°C
• Gene Information: mouse ... Hspg2(15530), Lama1(16772), Lama3(16774), Lama5(16776), Lamb1-1(16777), Lamc1(226519), Lamc2(16782), Nid1(18073), Sdc2(15529)

Beschreibung

Application

ECM-Gel kann mit Epithelzellen, Endothelialzellen, Muskelzellen, Nervenzellen und Tumorzellen verwendet werden.

ECM-Gel aus Engelbreth-Holm-Swarm-Sarkom der Maus wird zur Beschichtung von Gewebekulturplatten für verschiedene Gliom-Subtypen und C2C12-Muskelzellen verwendet. Es dient auch als Gerüst zur Steigerung von Anhaftung, Reifung und Überleben von Myotuben.

Biochem/physiol Actions

Das EZM-Gel polymerisiert, wenn es auf 20–40 °C erwärmt wird, und bildet eine rekonstituierte Basalmembran. Bei Kultivierung auf diesem EZM-Gel bilden PC12-Zellen innerhalb von 2 Tagen Neuriten aus.

Jede Mauskolonie, die für die Produktion dieses Produkts verwendet wird, wird routinemäßig auf mehrere Pathogene untersucht. Mit negativem Ergebnis auf LDEV getestet

Preparation Note

Dieses Produkt wird aus Engelbreth-Holm-Swarm-Sarkom der Maus hergestellt; gegen Chloroform dialysiert. Das Gel sollte vor der Verwendung über Nacht bei 2–8 °C auftauen und mit einer Platte und Pipetten, die auf 2–8 °C vorgekühlt wurden, in eine Multiwell-Platte ausgegeben werden. Das Gel kann Präzipitate enthalten, die keinen Einfluss auf seine Aktivität haben. Das Gel kann außerdem bei einer Temperatur von 2–8 °C mit Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium auf das bis zu Zweifache verdünnt werden; dies sollte vor dem Hinzufügen des Gels zur Platte geschehen. Das Produkt geliert bei 20 °C innerhalb von 5 Minuten. Eine längere Handhabung sollte bei Temperaturen unter 10 °C erfolgen. Die Zellen können auf einer dünnen Gelschicht von 0,5 mm ausplattiert oder in einer 1 mm dicken Schicht kultiviert werden. Wenn Zellen innerhalb der Schicht kultiviert werden, geben Sie die Zellen vor dem Ausplattieren mit einer empfohlenen Zelldichte von 3-4 x 10⁴ Zellen pro ml zum Gel hinzu. Um Zellen von diesem Gel zu trennen, verwenden Sie Protease mit PBS ohne Calcium, Magnesium oder EDTA bei einer Konzentration von 0,6–2,4 Einheiten pro ml.

Other Notes

ECM wurde auf eine Proteinkonzentration von 8-12 mg/ml eingestellt und enthält Laminin als Hauptbestandteil sowie Kollagen Typ IV, Heparinsulfatproteoglycan, Entactin und andere Nebenbestandteile. Die Zugabe von Typ-IV-Collagen zum ECM-Gel verstärkt die Polymerisation.
Die Modifizierung der Wachstumsfaktor-Reduktion ermöglicht eine bessere Kontrolle des Mediums, eine bessere Interpretation der Ergebnisse und eine gesteigerte Polymerisation. Das Medium besitzt außerdem kein Phenolrot, das einige Analysen beeinträchtigen könnte.

Disclaimer

Produkt für die Langzeitlagerung bei -20 °C aufbewahren. Das ECM-Gel kann bis zu 72 Stunden bei 2–8 °C aufbewahrt werden.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• Was ist los?: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable