Karakterisasi Biofarmasi

Bunga dandelion dengan latar belakang langit biru dengan beberapa biji yang tertiup angin.

Biofarmasi adalah obat medis yang diproduksi menggunakan metode bioteknologi. Ini termasuk antibodi monoklonal (mAbs), protein terapeutik, protein fusi, konjugat obat antibodi, dan bahan biologis lainnya. Pengujian karakterisasi adalah pemahaman tentang sifat fisik dan kimia bahan biofarmasi. Selama pengembangan obat, sifat-sifat ini dapat berdampak pada kinerja produk, kemampuan untuk diproses, stabilitas, dan penampilan.

Kategori Unggulan

Kolom HPLC

Mencapai pemisahan yang tepat dengan koleksi kolom HPLC kami yang luas. Tingkatkan retensi, resolusi, dan selektivitas. Pesan hari ini.

Belanja Produk

Kultur & Analisis Sel

Jelajahi rangkaian alat kultur sel canggih kami untuk penelitian, penemuan obat, dan manufaktur. Dari media hingga peralatan kultur, kami siap membantu Anda.

Belanja Produk

Protein dan Enzim

Menelusuri produk protein, enzim, dan molekul kecil untuk biologi sel, suplementasi kultur, dan studi jalur.

Belanja Produk

Standar Asam Amino, Peptida & Protein

Menelusuri produk protein, enzim, dan molekul kecil untuk biologi sel, suplementasi kultur, dan studi jalur.

Belanja Produk

Biologik, karakterisasi dan analisis biosimilar

Obat biologik memerlukan alur kerja analitik yang sangat canggih untuk analisis dan karakterisasinya dengan penekanan yang signifikan pada GMP dan kepatuhan terhadap peraturan. Pengembangan bioterapi orisinal atau biosimilar memerlukan studi karakterisasi produk untuk memastikan obat biologis yang kuat dan dispesifikasikan dengan baik.

Identitas

Penentuan Massa Utuh

Penentuan massa molekul utuh, yang sering dilakukan dengan SEC-MS dan standar yang sesuai, merupakan langkah penting dalam karakterisasi bahan biologis, mulai dari pemilihan klon hingga verifikasi produk akhir. Analisis massa molekul utuh biasanya digunakan untuk menunjukkan keragaman produk protein / peptida dan memverifikasi identitas bahan biologis. Dengan optimasi, juga dapat menentukan berat molekul utuh dari semua produk protein, termasuk antibodi monoklonal bispesifik.

Alih-alih berurusan dengan massa utuh yang berat dari protein biologis yang besar, pendekatan analisis pencernaan protein digunakan di mana sampel pertama kali dibelah menjadi hanya beberapa fragmen, setelah itu pemisahan dapat ditangani secara individual dengan standar proteomik spesifikasi massa khusus.

Pengukuran Titer

Produktivitas garis sel untuk menghasilkan mAb dalam jumlah yang cukup, memengaruhi potensi komersialnya. Digunakan sebagai pengukuran awal, titer diukur menggunakan kromatografi afinitas Protein-A (HPLC). Pada awalnya dalam pengembangan mAb, sejumlah besar sampel kultur sel panen (HCC) harus diskrining untuk titer IgG. Kromatografi afinitas yang menggunakan ligan Protein A sering digunakan untuk menentukan konsentrasi mAb serta memurnikannya untuk agregat hilir dan analisis varian muatan.

Analisis Asam Amino

Analisis asam amino & nbsp; adalah cara yang populer untuk menetapkan identitas produk dan digunakan dalam penentuan komposisi asam amino mAb. Hal ini sering dilakukan bersamaan dengan pengukuran koefisien kepunahan, sebuah metode yang secara rutin digunakan untuk menetapkan titer antara produksi yang berbeda.

Bahan Referensi Bersertifikat

dengan nilai yang ditetapkan oleh prosedur yang valid secara metrologis akan sangat penting untuk meminimalkan dan mengontrol variasi eksperimental dalam semua langkah alur kerja analisis asam amino termasuk ekstraksi protein, fraksinasi, pengayaan, proteolisis, dan analisis.

Pemetaan Peptida

Untuk mendapatkan indikasi identitas mAb, perbandingan peta peptida enzim tunggal yang sederhana mungkin sudah cukup. Karakterisasi antibodi terapeutik yang lebih rinci, termasuk pengurutan terminal N atau C, karakterisasi glikan, dan aspek lain dari produksi, analisis, pemurnian, dan fragmentasi antibodi dapat memberikan informasi yang lebih baik untuk rekayasa produk.Spektrometri massa proteomik memberikan informasi struktural tambahan.

Modifikasi Pasca-Translasi

Analisis N-glikan

Glikosilasi yang sangat bervariasi dapat memengaruhi kemurnian mAb dan menghasilkan fungsi yang bervariasi. Antibodi monoklonal membawa N-glikan pada tulang punggungnya yang dapat dilepaskan menggunakan LC-MS untuk menilai pola glikosilasi. Karakterisasi N-glikan & nbsp; dari antibodi monoklonal diperlukan, untuk memberikan detail struktural lengkap dari molekul yang sedang diselidiki. Memahami jalur N-glikan ini penting karena N-glikan memengaruhi banyak sifat glikoprotein termasuk konformasi, kelarutan, antigenisitas, dan pengenalan oleh protein pengikat glikan.

Perbandingan Struktur Tingkat Tinggi (HOS) Antibodi Monoklonal (mAbs)

Banyak faktor yang memengaruhi HOS & nbsp;-struktur 3D mAb - mulai dari pilihan garis sel untuk produksi mAb hingga kondisi bioproses seperti suhu, pH, dan paparan cahaya. Spektrometri massa pertukaran hidrogen deuterium (HDX-MS) adalah metode yang digunakan untuk mendapatkan wawasan terperinci tentang struktur tersier mAb.

Analisis Modifikasi mAb

Banyak modifikasi pascatranslasi yang berbeda dapat terjadi selama proses pembuatan mAb, yang sangat dipengaruhi oleh parameter proses seperti media, suhu, dan lain-lain. Untuk menghasilkan produk yang konsisten, sangat penting untuk mereproduksi modifikasi ini selama setiap putaran sintesis mAb. Analisis modifikasi meliputi pemetaan jembatan disulfida, dan evaluasi struktur dasar glikan. Sebaiknya juga mengukur sialilasi, karena asam sialat dapat memiliki efek negatif pada mAb.

Distribusi Muatan mAb

Sebagai hasil dari modifikasi pasca-translasi (PTM) atau modifikasi kimiawi, varian muatan dapat memiliki dampak yang cukup besar terhadap aktivitas biologis dan farmakokinetik mAb. Sebagai persyaratan peraturan untuk mAbs, analisis varian muatan dapat dievaluasi dengan teknik termasuk kromatografi pertukaran kation (CEX) dan pemfokusan isoelektrik kapiler (cIEF).

mAb Pengujian Fisik & Distribusi Ukuran

Pengujian FisikmAb

Pengujian fisik digunakan untuk mengkarakterisasi penampilan mAb, misalnya pengukuran pH, osmolalitas, dan konsentrasi. Integritas kemasan juga dinilai dalam protokol pengujian fisik, misalnya menggunakan analisis kelembaban Karl Fischer atau masuknya zat warna untuk mengonfirmasi integritas penutupan.

Distribusi Ukuran mAb

Meskipun produk mAb tunggal diinginkan, bahan produksi awal sering kali mengandung varian ukuran seperti agregat, fragmen, dan biomolekul yang menunjukkan rantai cahaya tambahan. Karena hal ini berpotensi memengaruhi imunogenisitas dan potensi, penting untuk memantau keberadaannya. Kromatografi pengecualian ukuran (SEC) adalah metode yang paling umum digunakan untuk mengevaluasi distribusi ukuran.
Sterilitas dan Pengotor

Pengotor Protein Sel Inang

Pengotor protein sel inang (HCP), yang terdapat pada tingkat PPM dalam bioterapi, merupakan risiko imunogenisitas utama, karena dapat menimbulkan respons imun yang tidak dapat diprediksi pada pasien. Sifatnya yang kompleks dan beragam membuatnya sulit untuk dideteksi atau dipantau. Meskipun sebagian besar pengotor HCP secara efektif dihilangkan dalam proses pemurnian hilir yang khas, populasi kecil HCP sangat menantang. Knockout dari CHO HCP yang sulit dihilangkan, lipoprotein lipase telah dikembangkan untuk meningkatkan stabilitas polisorbat dalam formulasi antibodi monoklonal.

Pemantauan Aditif Manufaktur

Berbagai macam aditif manufaktur harus dipantau selama pengembangan dan pembuatan mAb termasuk & nbsp;Deterjen, Protein A, & nbsp;Reagen transmisi, Antibiotik, Agen anti-busa, dan Faktor pertumbuhan.

Pengujian Mikroba mAbs

Berbagai macam prosedur pengujian mikroba diperlukan untuk GMP dan pengembangan serta produksi farmasi yang sesuai. Banyak mAbs diproduksi dalam mikroorganisme untuk mendapatkan keuntungan dari tingkat pertumbuhan yang cepat dan hasil yang tinggi, sehingga sangat penting untuk memantau dan mengendalikan keberadaan kontaminan mikroba. Komponen dinding sel bakteri Gram negatif, yang disebut endotoksin, menghasilkan respons mulai dari demam dan menggigil hingga syok septik yang fatal, sehingga membuat & nbsp;pengujian deteksi pirogen (MAT & nbsp;in vitro & nbsp;pengujian) & nbsp;& nbsp;dan penghapusan selanjutnya dari mAb sangat penting dan menjadi persyaratan peraturan.Pengujian bioburden harus dilakukan di seluruh proses pembuatan mAb untuk memantau keberadaan kontaminasi mikroba yang berpotensi berbahaya, dan pengujian sterilitas juga penting untuk memastikan integritas produksi mAb.