Sitometri Aliran

Antibodi dan Label Sitometri Aliran

Melakukan analisis sitometri aliran melibatkan penggunaan berbagai antibodi dan label sitometri aliran. Antibodi flow cytometry digunakan untuk secara khusus mengikat penanda sel yang berbeda, membantu mengkarakterisasi jenis sel dan menilai setiap perubahan dalam ekspresi protein sebagai bagian dari percobaan. Berbagai jenis label dapat digunakan untuk memvisualisasikan antibodi untuk deteksi dalam flow cytometer tergantung pada desain eksperimental termasuk pewarna asam nukleat, pewarna kelangsungan hidup sel, pewarna polimer, titik-titik kuantum, molekul organik kecil, dan protein neon. Antibodi biasanya diberi label melalui konjugasi langsung (baik sebagai produk yang tersedia secara komersial atau kit konjugasi yang memungkinkan pengguna akhir untuk melakukan reaksi) atau melalui penggunaan antibodi sekunder.

Aplikasi Sitometri Aliran

Berbagai bidang studi menggunakan sitometri aliran dan sering kali menganalisis berbagai parameter dalam populasi sel yang beragam. Aplikasi biologi molekuler yang umum termasuk analisis protein fluoresen yang diekspresikan secara rekombinan yang telah menginduksi ekspresi dalam berbagai jenis sel untuk menjelaskan fungsi gen atau untuk pelacakan sel secara in vivo. Sedangkan pewarnaan DNA memungkinkan untuk analisis siklus sel, penggunaan antibodi memungkinkan untuk berbagai analisis termasuk, transduksi sinyal, RNA, dan ekspresi protein. Namun, imunofenotipe adalah salah satu aplikasi yang paling umum digunakan dalam flow cytometry. Dengan imunofenotipe, antibodi terkonjugasi fluorokrom menargetkan beberapa antigen permukaan sel untuk mengidentifikasi sel imun spesifik dalam populasi sel.

Analisis Data Flow Cytometry

Analisis data flow cytometry sering kali melibatkan identifikasi wilayah atau klaster sel tertentu dan menerapkan parameter tambahan dalam percobaan, termasuk menyelidiki apakah ada faktor pengenal sel tambahan untuk mendapatkan wawasan lebih lanjut tentang identitas seluler. Banyak program perangkat lunak komputer yang tersedia dan biasa digunakan untuk memfasilitasi analisis data semacam ini dan analisis siklus sel lainnya.

Instrumentasi Flow Cytometry

Ringkasan komponen utama yang digunakan dalam flow cytometry meliputi elektronik, optik, dan fluidika. Fluida berfungsi sebagai sistem pengiriman cairan untuk mengarahkan sampel ke komponen optik, yang terdiri dari optik eksitasi (laser) dan optik koleksi yang terdiri dari fotodioda dan tabung fotomultiplier (PMT). Yang penting, komponen elektronik mengubah informasi dari detektor menjadi sinyal digital yang ditafsirkan oleh komputer. Combinations of additional systems facilitate more advanced sample analyses, including the use of cell sorters to purify and collect samples, and imaging cytometers that combine both flow cytometry with fluorescence microscopy.