Teknik Pull-Down Protein

Aplikasi Pull-Down GST Afinitas

Glutathione S-transferase (GST) adalah protein asam amino 211 yang ditemukan di sebagian besar organisme. GST sering diintegrasikan ke dalam vektor ekspresi untuk menghasilkan tag fusi dalam sistem ekspresi protein E. coli. Tag GST adalah tag protein besar, sekitar 26 kDa, dan dapat diekspresikan dalam bakteri, ragi, mamalia, dan sel serangga. Tag GST menguntungkan ketika perlindungan protein rekombinan dari pembelahan protease intraseluler diperlukan, dan ketika ada kebutuhan untuk meningkatkan kelarutan protein yang ditandai. Selain itu, protein GST menyediakan tag afinitas tinggi untuk memudahkan pemurnian dan untuk eksperimen pull-down menggunakan resin afinitas murah yang dilakukan dalam kondisi elusi ringan.

Co-Immunopresipitasi

Pull-down assay sangat ideal untuk verifikasi hasil co-imunopresipitasi dan merupakan metode yang sangat baik untuk mengidentifikasi interaksi protein-protein yang tidak diketahui bersama dengan status aktivasi protein tertentu. Tidak seperti metode pull-down afinitas, IP menggunakan antibodi untuk mengikat dan mengisolasi antigen dari sampel biologis yang kompleks. Kompleks tersebut kemudian ditangkap dengan penambahan media protein A atau protein G. Afinitas yang tinggi dari protein A/G ke daerah Fc dari antibodi tipe IgG poliklonal dan monoklonal membuat mereka menjadi komponen penting dalam pemurnian protein atau kompleks protein yang diinginkan. Penggunaan metode pull-down protein merupakan alat yang penting untuk menyelidiki jaringan interaksi protein-protein; namun, pilihan metode spesifik akan ditentukan oleh kebutuhan aplikasi spesifik peneliti.