03-102

RIPAb+ HuR - przeciwciało i zestaw primerów zweryfikowane pod kątem RIP

from rabbit

• Synonim(y): Białko podobne do ELAV 1, antygen Hu R
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• clone: polyclonal
• species reactivity: mouse, human, rat
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunohistochemistry: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NP_001410
• UniProt accession no.: Q15717
• shipped in: dry ice
• Gene Information: human ... ELAVL1(1994)

Opis

General description

35 kDa

Przeciwciała RIPAb+ są oceniane przy użyciu testu immunoprecypitacji białek wiążących RNA (RIP). Każdy zestaw przeciwciał RIPAb+ zawiera startery kontroli ilościowej RT-PCR (startery RIP) w celu biologicznej walidacji wyników IP poprzez udaną koprecypitację określonego celu RNA (jeśli taki określony cel jest znany). Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów RIP podczas stosowania przeciwciała w ich kontekście eksperymentalnym. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne w celu zapewnienia specyficzności reakcji RIP.
Zestaw RIPAb+ HuR zawiera przeciwciało HuR, ujemne przeciwciało kontrolne (oczyszczone królicze IgG) oraz pozytywne startery qPCR, które amplifikują fragment 100 bp ludzkiej beta-aktyny (ACTB) cDNA. Przeciwciała HuR i przeciwciała kontroli ujemnej są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "na RIP" i mogą być stosowane do funkcjonalnej walidacji RNA związanego z HuR.

Immunogen

Epitop: a.a. 1-13 HuR

Application

Immunoprecypitacja z lizatu RIP:
Lizat RIP z komórek MCF7 (2 X¹⁰⁶ równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 0,5 μg normalnej króliczej IgG lub przeciwciała anty-HuR. Wytrącone białka rozdzielono za pomocą elektroforezy, przeniesiono na nitrocelulozę i sondowano anty-HuR (1,0 μg/ml).
Białka wizualizowano przy użyciu zestawu One-Step IP-Western (GenScript nr kat. L00231) (patrz rysunki).

Analiza Western Blot:
Lizat 3T3/A31 rozdzielono za pomocą elektroforezy, przeniesiono na membrany PVDF i sondowano za pomocą HuR, hu (rozcieńczenie 1:500). Białka były wizualizowane przy użyciu anty-Rabbit Osła sprzężonego z HRP i wizualizowane przy użyciu systemu detekcji chemiluminescencji. (Patrz rysunki).

Analiza immunoprecypitacji:
10 ug tego przeciwciała immunoprecypitowało HuR z 500 ug lizatu 3T3/A31 RIPA (patrz rysunki).

Analiza immunocytochemiczna:
Konfokalna analiza IF komórek HeLa, NIH/3T3 z użyciem anty-HuR (czerwony). Filamenty aktyny zostały oznaczone za pomocą AlexaFluor 488 - Phalloidin (zielony). Jądro jest wybarwione DAPI (niebieski) (patrz rysunki).

Zestaw RIPAb+ HuR -RIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Physical form

Anty-HuR (króliczy poliklonalny). Jedna fiolka zawierająca 50 μg oczyszczonego poliklonalnego królika w 100 μl buforu zawierającego PBS w 0,05% azydku sodu z 50% glicerolem. Ciecz w temperaturze -20°C.

Normalna królicza IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 μg oczyszczonej króliczej IgG w 125 μL buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery RIP, ACTB. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego startera specyficznego dla ludzkiej beta-aktyny (ACTB). Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: TTG TTA CAG GAA GTC CCT TGC C
REV: ATG CTA TCA CCT CCC CTG TGT G

Format: Oczyszczony

Analysis Note

Kontrola
Zawierała królicze przeciwciało IgG kontroli ujemnej i startery kontrolne specyficzne dla ludzkiej aktyny beta (ATCB).

RNA binding protein Immunoprecipitation:
RIP Lysate prepared from HeLa cells (2 x 10⁷ cell equivalents per IP) were subjected to immunoprecipitation using 5 µg of either a normal Rabbit IgG or Anti-HuR antibody and the Magna RIP Kit (Cat. # 17-700).
Successful immunoprecipitation of HuR-associated RNA was verified by qPCR using RIP Primers, ACTB (Please see figures).
Please refer to the Magna RIP^® (Cat. # 17-700) or EZ-Magna RIP (Cat. # 17-701) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Temperatura zapłonu (°F): Not applicable
• Temperatura zapłonu (°C): Not applicable
• Co się dzieje?: WGK 2