03-250

Przeciwciało RIPAb+ Ago3

clone 4B1-F6, from mouse

• Synonim(y): eIF-2C 3, eIF2C 3, FLJ12765, MGC86946
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702

Właściwości

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• antibody form: purified antibody
• clone: 4B1-F6, monoclonal
• species reactivity: human
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable
• isotype: IgG2aκ
• NCBI accession no.: NP_079128
• UniProt accession no.: Q9H9G7
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Przeciwciała RIPAb+ są oceniane przy użyciu testu immunoprecypitacji białek wiążących RNA (RIP). Każdy zestaw przeciwciał RIPAb+ zawiera ujemne przeciwciało kontrolne w celu zapewnienia swoistości reakcji RIP i jest weryfikowany pod kątem koimmunoprecypitacji RNA związanego specyficznie z immunoprecypitowanym białkiem wiążącym RNA będącym przedmiotem zainteresowania. W stosownych przypadkach zestaw RIPAb+ zawiera również startery kontrolne do ilościowego RT-PCR (startery RIP) w celu biologicznej walidacji wyników IP poprzez udaną ko-precypitację określonych docelowych RNA, takich jak informacyjny RNA. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów RIP podczas stosowania przeciwciała w ich kontekście eksperymentalnym. Jeśli nie dostarczono testu specyficznego dla celu, zestaw RIPAb+ jest walidowany przy użyciu zautomatyzowanego testu opartego na mikroprzepływach poprzez wzbogacenie wykrywalnego RNA w stosunku do kontrolnej immunoprecypitacji.
Ago3 (eukariotyczny czynnik inicjacji translacji 2C 3) należy do rodziny argonautów i zawiera domenę PAZ i Piwi. Ago3 odgrywa rolę w szlaku interferencji RNA (RNAi), który jest ważny dla tworzenia heterochromatyny i dokładnej segregacji chromosomów.

~96 kDa

Immunogen

Rekombinowane białko odpowiadające ludzkiemu Ago3

Application

Ago3 (eukariotyczny czynnik inicjacji translacji 2C 3) należy do rodziny argonautów i zawiera domenę PAZ i Piwi. Ago3 odgrywa rolę w szlaku interferencji RNA (RNAi).

Immunoprecypitacja białka wiążącego RNA (mikroRNA):

Reprezentatywne dane partii.
Lizat RIP przygotowany z komórek 293 (2 X 107 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 5 µg normalnej mysiej IgG (nr kat. CS200621) lub przeciwciała Anti-Ago 3 (nr kat. CS207366) i zestawu do immunoprecypitacji białka wiążącego RNA Magna RIP (nr kat. 17-700).
Pomyślna immunoprecypitacja mikroRNA związanego z Ago 3 została zweryfikowana za pomocą testu TaqMan microRNA, hsa-miR-15a. (Rysunek 2). Szczegóły eksperymentu można znaleźć w protokole Magna RIP (nr kat. 17-700) lub EZ-Magna RIP (nr kat. 17-701).
Analiza immunocytochemiczna:
Reprezentatywne dane partii.
Konfokalna analiza fluorescencyjna komórek HeLa przy użyciu anty-Ago3, klon 4B1-F6 (czerwony). Filamenty aktyny zostały wyznakowane barwnikiem Alexa Fluor 488 - falloidyna (zielony). Jądro jest wybarwione DAPI (niebieski). To przeciwciało pozytywnie wybarwia cytoplazmę.
(Alexa Fluor jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Life Technologies).
Analiza immunoprecypitacji: Reprezentatywna partia została użyta przez niezależne laboratorium w komórkach HeLa. (Azuma-Mukai, A., et al. (2008). Proc Natl Acad Sci USA. 105(23):7964-7969.)

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Białko wiążące RNA (RBP)

Biochem/physiol Actions

Wykazano, że przeciwciało to nie reaguje krzyżowo z Ago1, Ago2 lub Ago4 (Azuma-Mukai A et al. (2008) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105: 7964-7969).

Packaging

10 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~5 µg przeciwciała na RIP (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Ago3 (mysi monoklonalny). Jedna fiolka zawierająca 50 µg oczyszczonego białka G monoklonalnego w buforze zawierającym 0,1 M Tris-glicyny (pH 7,4), 150 mM NaCl, 0,05% azydku sodu przed dodaniem glicerolu do 30%. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Stężenie: 0,7 mg/ml
Normalne mysie IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 µg oczyszczonej mysiej IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
RIP Primer IGF2. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego mRNA IGF2. Przechowywać w temperaturze
-20°C.
FOR: GCG GCT TCT ACT TCA GCA G
REV: CAG GTG TCA TAT TGG AAG AAC

Format: Oczyszczony

Oczyszczone białko G

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.
Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera normalną króliczą IgG i startery specyficzne dla ludzkiego IGF2 mRNA.

RNA Binding Protein Immunoprecipitation:
Representative lot data
RIP Lysate prepared from 293 cells (2 X 10E7 cell equivalents per IP) were subjected to immunoprecipitation using 5 µg of either a normal mouse IgG , or 5 µg Anti-Ago 3 antibody and the Magna RIP^® RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Cat. # 17-700).
Successful immunoprecipitation of Argonaute 3-associated RNA was verified by qPCR using RIP Primers IGF2, (Figure 1).
Please refer to the Magna RIP (Cat. # 17-700) or EZ-Magna RIP (Cat. # 17-701) protocol for experimental details.

Other Notes

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1