70636

Zestaw do klonowania pETBlue-2 Perfectly Blunt^® - Novagen

• NACRES: NA.54
• UNSPSC Code: 41106610

Właściwości

• manufacturer/tradename: Novagen^®
• Quality Segment: 100
• storage condition: OK to freeze
• technique(s): molecular cloning: suitable
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −70°C

Opis

General description

Zestawy do klonowania Perfectly Blunt^® są przeznaczone do uproszczonego klonowania DNA generowanego metodą PCR przy użyciu dowolnego typu polimerazy DNA. Podejście to umożliwia wykorzystanie enzymów korekcyjnych o wysokiej wierności do amplifikacji, zmniejszając w ten sposób prawdopodobieństwo generowania mutacji w sekwencji docelowej. Ponadto, w wielu warunkach klonowanie tępe jest bardziej wydajne niż klonowanie T, najprawdopodobniej ze względu na obserwację, że wydajność dodawania pojedynczego dA przez polimerazę Taq DNA różni się znacznie w zależności od kontekstu sekwencji końców DNA, a nawet liczby wykonanych cykli PCR (Novy 1996, Clark 1998, Brownstein 1996, Magnuson, 1996, Hu 1993).

Dzięki protokołowi klonowania Perfectly Blunt można przejść od produktu PCR do umieszczenia transformantów na płytkach w mniej niż godzinę przy minimalnym nakładzie pracy. Gotowy produkt PCR jest przekształcany w tępą, fosforylowaną formę w 15-minutowej reakcji przy użyciu wstępnie zmieszanych odczynników. Po 5-minutowym etapie inaktywacji cieplnej, przetworzony insert jest łączony z gotowym do użycia wektorem i ligowany w zoptymalizowanej 15-minutowej reakcji. Ekskluzywna 8-minutowa procedura transformacji przy użyciu wysoce wydajnych kompetentnych komórek NovaBlue Singles (nr kat. 70181) generuje rekombinowane kolonie, które można łatwo wizualizować za pomocą niebiesko-białego badania przesiewowego. Należy pamiętać, że metoda Perfectly Blunt nie ogranicza się do klonowania produktów PCR; zestawy te nadają się również do klonowania fragmentów restrykcyjnych, cDNA lub ściętego DNA przy użyciu tych samych protokołów.

W zestawach do klonowania Perfectly Blunt^® dostępnych jest siedem różnych wektorów. Wybór wektorów obejmuje te zaprojektowane do ogólnego klonowania, sekwencjonowania, optymalnej transkrypcji/translacji in vitro i optymalnej ekspresji białek w E. coli. Każdy wektor jest dostępny w zestawie zawierającym odczynniki wystarczające na 10, 20 lub 40 reakcji.

Zestawy "tylko wektorowe" są również dostępne w rozmiarach 20 i 40 reakcji bez ligazy i komórek kompetentnych. Aby uzyskać komórki kompetentne o wyższej wydajności, należy również rozważyć zestaw pSTBlue-1 Perfectly Blunt Giga Cloning Kit (nr kat. 71229).

Wektor pETBlue-2 został zaprojektowany do identyfikacji rekombinantów za pomocą tradycyjnego niebiesko-białego badania przesiewowego, jednocześnie umożliwiając ekspresję genów docelowych w oparciu o promotor T7lac. Badanie przesiewowe jest niezależne od ekspresji, ponieważ promotor ekspresji T7lac znajduje się w przeciwnej orientacji w stosunku do promotora E. coli, który pośredniczy w niebieskim/białym badaniu przesiewowym. pETBlue-2 definiuje otwartą ramkę odczytu, a wstawki muszą być klonowane w ramce, jeśli pożądana jest ekspresja. Wektor posiada rozszerzone miejsce wielokrotnego klonowania (MCS) i opcjonalne C-końcowe sekwencje HSV-Tag i His-Tag. Sekwencja jest numerowana od pierwszej zasady sekwencji promotora T7.

Oprócz systemów pETBlue, które zawierają niecięte plazmidy, wektory pETBlue są dostępne w formatach gotowych do wstawienia produktów PCR. Dostępne są dwa rodzaje zestawów: AccepTor Vector Kits i Perfectly Blunt^® Cloning Kits. AccepTor Vector Kit umożliwia bezpośrednią insercję DNA zawierającego pojedyncze zwisy 3′-dA, takie jak te amplifikowane za pomocą polimeraz DNA bez proofreadingu (np. NovaTaq DNA Polymerase), podczas gdy Perfectly Blunt Cloning Kits są przeznaczone do klonowania insertów posiadających dowolny typ końca DNA.

Features and Benefits

• Brak enzymów restrykcyjnych lub specjalnych starterów
• Kompatybilność z dowolną polimerazą DNA
• Niezależny od dodatku 3ʹ-dA lub kontekstu sekwencji końców DNA
• Niebieski/biały screening z siedmioma różnymi wektorami, w tym wektorami ekspresyjnymi pETBlue
• Prosty protokół zajmuje mniej niż jedną godzinę* od produktu PCR do posiewu transformantów

* Wszystkie wymienione czasy odnoszą się do zestawów wykorzystujących kompetentne komórki NovaBlue Singles i selekcję ampicyliną lub chloramfenikolem. Zestawy Giga, które używają komórek kompetentnych NovaBlue GigaSingles, wymagają jednej godziny na wyhodowanie.

Packaging

Plastikowa ampułka

Legal Information

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Perfectly Blunt is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Toksyczność: Wiele wartości toksyczności, patrz MSDS

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.