HTS064M

ChemiSCREEN Ludzki receptor angiotensyny II, preparat błonowy typu I

Human AT1 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.

• UNSPSC Code: 41106514
• NACRES: NA.84
• eCl@ss: 32161000

Właściwości

• Nazwa produktu: ChemiSCREEN Ludzki receptor angiotensyny II, preparat błonowy typu I, Human AT1 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.
• biological source: human
• recombinant: expressed in Chem-1 cells
• manufacturer/tradename: ChemiScreen; Chemicon^®
• technique(s): ligand binding assay: suitable (GTPγS); radioligand binding assay (RLBA): suitable
• NCBI accession no.: NM_000685.4; NM_004835.3; NM_009585.3; NM_031850.2; NM_032049.2
• UniProt accession no.: P30556
• shipped in: dry ice
• Quality Level: 100
• Gene Information: human ... AGTR1(185)

Opis

Application

Test wiązania radioligandu i wiązanie GTPγS.

Features and Benefits

Warunki indukcji
Membrany są mieszane z radioaktywnym ligandem i nieznakowanym konkurentem (patrz rysunki 1 i 2 dla badanych stężeń) w buforze wiążącym na niewiążącej 96-dołkowej płytce i inkubowane przez 1-2 h. Przed filtracją 96-dołkowa płytka filtracyjna GF/C jest powlekana 0,33% polietylenoiminą przez 30 min, a następnie przemywana 50 mM HEPES, pH 7,4, 0,5% BSA. Reakcja wiązania jest przenoszona na płytkę filtracyjną i przemywana 3 razy (1 ml na studzienkę na przemywanie) buforem do przemywania. Płytka jest suszona i liczona.
Bufor wiążący: 50 mM Hepes, pH 7,4, 5 mM _MgCl2, 1 mM _CaCl2, 0,2% BSA, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.
Radioligand:^[125I]-Sar1-Ile8-Angiotensin II. (Perkin Elmer#:NEX-248 )
Bufor płuczący: 50 mM Hepes, pH 7,4, 500 mM NaCl, 0,1% BSA, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.
Jedno opakowanie zawiera membrany wystarczające na co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jednostka to ilość membrany, która da ponad 50-krotny stosunek sygnału do tła ze znakowaną ^125ISar1-Ile8-Angiotensyna II przy 0,3 nM.

General description

Angiotensyna II (Ang II), oktapeptyd wytwarzany przez rozszczepienie angiotensynogenu przez enzym konwertujący angiotensynę, odgrywa fundamentalną rolę w homeostazie układu sercowo-naczyniowego. Dwa receptory GPCR, _AT1 i _AT2, pośredniczą w działaniu AngII, chociaż _AT1 jest przede wszystkim odpowiedzialny za wpływ Ang II na czynność i rozwój nerek, pragnienie, równowagę elektrolitową i wodną oraz ciśnienie tętnicze krwi. Wiązanie Ang II z _AT1 aktywuje zarówno _Gq, jak i_Gi (De Gasparo i in., 2000). Preparaty błonowe _AT1 firmy Chemicon są surowymi preparatami błonowymi wykonanymi z naszych zastrzeżonych stabilnych rekombinowanych linii komórkowych w celu zapewnienia wysokiego poziomu ekspresji powierzchniowej GPCR; dlatego są idealnymi narzędziami HTS do badań przesiewowych antagonistów interakcji _AT1 i jego ligandów. Preparaty błonowe wykazują Kd 0,36 nM dla^[125I]-Sar1-Ile8-Angiotensyny II. Przy 0,3 nM^[125I]-Sar1-Ile8-Angiotensyny II, preparat membranowy _AT1 o stężeniu 5 µg/dołek daje ponad 50-krotny stosunek sygnału do tła.

Pełnej długości ludzki cDNA kodujący _AT1

Physical form

Płyn w buforze opakowaniowym: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA bez konserwantów.
Metoda pakowania: Białko membranowe dostosowano do 0,5 mg/ml w 1 ml buforu do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80oC.

Preparation Note

Przechowywać zamrożone w temperaturze -70°C przez okres do 2 lat. Nie zamrażać i nie rozmrażać.

Analysis Note

Signal:background and specific binding values obtained in a competition binding assay with varying amounts of ATaub1 membrane prep:
tabletrth align="left"/tdth align="center"10 µg/well/tdth align="center"5 µg/well /td/trtrtd align="left" Signal:Background/tdtd align="center" 115.5/tdtd align="center" 92.8/td/trtrtd align="left" Specific Binding (cpm) /tdtd align="center"46,458/tdtd align="center"43,007 /td/tr/table

SPECIFICATIONS: 1 unit = 5 µg
Bmax for [¹²⁵I] Angiotensin II binding: 5.53 pmol/mg protein;
Kd for [¹²⁵I] Angiotensin II binding: ~ 0.36 nM

Biochem/physiol Actions

GPCR Class: A

Protein Target: AT1

Target Sub-Family: Angiotensin

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 2
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable