ES-R1-EGFP B5/EGFP

NOTE: Both the cell line and DNA from the cell line may be available for this product. Please choose -1VL or VIAL for cells, or -DNA-5UG for DNA.

• Synonim(y): B5/EGFP, ES-R 1, ES-R-1, ESR-1, ESR1
• UNSPSC Code: 41106514
• Biological source: mouse embryo
• Growth mode: Adherent
• Karyotype: Not specified
• Morphology: Adherent monolayer of spheroidal cells on feeder layer of mouse primary embryonic fibroblasts
• Manufacturer/tradename: ECACC

Właściwości

• biological source: mouse embryo
• manufacturer/tradename: ECACC
• packaging: tube of 5 μg 07072007-DNA-5UG, pkg of vial of cells 07072007-1VL
• growth mode: Adherent
• karyotype: Not specified
• morphology: Adherent monolayer of spheroidal cells on feeder layer of mouse primary embryonic fibroblasts
• products: Not specified
• receptors: Not specified
• technique(s): cell culture | mammalian: suitable
• shipped in: dry ice

Opis

Biochem/physiol Actions

Embrionalne komórki macierzyste myszy, ekspresja GFP

Pluripotencjalna linia mysich embrionalnych komórek macierzystych wyrażająca GFP. Ten wariant zielonej fluorescencji został wygenerowany przez losową integrację transgenu EGFP do ES-R1 (nr kat. ECACC 07072001) przy użyciu ko-elektroporacji z selektywnym markerem zawierającym wektor pPGK Puro. Wektor jest napędzany przez natychmiastowy wczesny wzmacniacz CMV sprzężony z promotorem beta-aktyny kurczaka i pierwszym intronem.

Not specified

Preparation Note

Embrionalne komórki macierzyste (ES) wymagają użycia mitotycznie inaktywowanych komórek zasilających w celu wsparcia wzrostu komórek macierzystych w stanie niezróżnicowanym. Można stosować mysie fibroblasty embrionalne, STO (ECACC 86032003) lub SNL 76/7 (ECACC 07032801). W ECACC plastikowe naczynia są wstępnie powlekane żelatyną przed umieszczeniem komórek podajnika. <p>Żelatyna wieprzowa (Sigma G1890) jest rozpuszczana w sterylnej wodzie (0,5 g/500 ml) w 56 ^°C. Roztwór 0,1% jest sterylizowany przez filtrację (0,22 μm). Dodać 0,1% żelatynę do plastikowego naczynia, aby przykryć dno i inkubować przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Usunąć żelatynę, przemyć raz PBS i zastąpić odpowiednim podłożem hodowlanym. <strong>Kolba/kieliszek nie może wyschnąć.</strong>

Warstwy podajnika są przygotowywane na zżelatynowanych kolbach co najmniej 24 godziny przed ich użyciem. Ampułka jest rozmrażana ^właźni wodnej o temperaturze 37°C, a jej zawartość szybko przenoszona do 15 ml probówki wirówkowej. Pożywkę MEF dodaje się kroplami do 5 ml. Komórki są odwirowywane z prędkością 150 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej (RT). Komórki są ponownie zawieszane w 5 ml pożywki MEF. Komórki są liczone i dodawane do kolb zawierających odpowiednią pożywkę w ilości 1-3 x^{104 komórek/cm2}.

Ampułka z komórkami ES jest rozmrażana w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, a jej zawartość jest szybko przenoszona do 15 ml probówki wirówkowej. Pożywkę KSR dodaje się kroplami do objętości 5 ml. Komórki są odwirowywane z prędkością 150 x g przez 5 minut. Komórki są ponownie zawieszane w 5 ml pożywki KSR. Przygotowaną kolbę zasilającą przepłukuje się raz PBS i dodaje pożywkę KSR. Komórki ES należy umieścić w ilości 4-5 x^{104 komórek/cm2}. Hodowle należy inkubować w nawilżanym 5%_CO2/95% powietrzem inkubatorze w temperaturze ^37°C. Codziennie należy wymieniać 100% pożywki i pasażować komórki co 2-3 dni. Kolonie nie mogą stykać się ze sobą, ponieważ nadmierny wzrost spowoduje różnicowanie.

Pożywka MEF składa się z Advanced DMEM/F12 (Invitrogen 12634010), 10% FBS (Perbio SH30070.03E), 2 mM glutaminy (Invitrogen 25030024) i 0,1 mM β-merkaptoetanolu (Sigma M6250).

Podłoże KSR składa się z KO-DMEM (Gibco 10829), 20% Knock-Out Serum Replacer (Gibco 10828), 2 mM glutaminy (Invitrogen 25030024), NEAA (Invitrogen 11140035), 0,1 mM β-merkaptoetanolu (Sigma M6250) i LIF 1000 jednostek/ml (ESGRO ESG1106).

Other Notes

W przypadku przesyłek w regionie Azji i Pacyfiku mogą obowiązywać dodatkowe opłaty za transport i obsługę. Więcej informacji można uzyskać u lokalnego przedstawiciela działu obsługi klienta.

This cell line is part of the European Collection of Authenticated Cell Cultures (ECACC), an international repository managed by the United Kingdom Health Security Agency (UKHSA). Use of this product by commercial organizations may require a license agreement. Commercial customers will be contacted by cellscreening@merckgroup.com to provide further information after the order request is submitted. Any other use of these products is prohibited without the express written permission of UKHSA. Inquiries regarding authorized use of this cell line or its genomic DNA may be directed to culturecollections@ukhsa.gov.uk.

Disclaimer

Ta linia komórkowa ma specjalne warunki dopuszczenia: Organizacje komercyjne są zobowiązane do wypełnienia formularza "Zezwolenie na uwolnienie linii komórkowej do celów badawczych w organizacjach komercyjnych".

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.