CLL1149

Komórki A549 GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1

human male lung (Source Disease: Lung carcinoma)

• UNSPSC Code: 41106514
• NACRES: NA.81
• Biological source: human male lung (Source Disease: Lung carcinoma)

Właściwości

• Nazwa produktu: Komórki A549 GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1,
• biological source: human male lung (Source Disease: Lung carcinoma)
• Quality Segment: 200
• OMIM accession no.: 116806, 150340
• storage temp.: −196°C
• Gene Information: human ... CTNNB1(1499), LMNB1(4001)

Opis

General description

A549 GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1 to komórki raka płuc pochodzące od 58-letniego mężczyzny rasy kaukaskiej, posiadające dwie różne modyfikacje ZFN tworzące dwa transgeny fluorescencyjne, z których każdy ulega ekspresji z ich endogennego locus genowego.

Ta linia komórkowa pochodzi z katalogu ATCC nr CCL-185.

Application

Aby dowiedzieć się więcej, odwiedź stronę internetową Cellular Reporter Cell Line.

Produkt ten jest ludzką linią komórkową A549, w której genomowy gen CTNNB1 został endogennie wyznakowany epitopem 3XFLAG^™ połączonym z genem zielonego białka fluorescencyjnego (GFP), a gen LMNB1 został endogennie wyznakowany genem czerwonego białka fluorescencyjnego (RFP) przy użyciu technologii nukleazy palca cynkowego (ZFN) CompoZr^®. Integracja spowodowała endogenną ekspresję białek fuzyjnych, w których 3XFLAG-GFP jest przyłączony do N-końca CTNNB1, a RFP jest przyłączony do N-końca LMNB1. Obrazowanie fluorescencyjne pokazuje ekspresję CTNNB1 w całej komórce i ekspresję LMNB1 zlokalizowaną w jądrze. Po aktywacji LiCl/leptomycyną B lub ligandem Wnt3a proteoliza CTNNB1 jest zmniejszona, dzięki czemu można zaobserwować translokację do jądra, dzięki czemu linia komórkowa jest przydatna do badań przesiewowych o wysokiej zawartości w celu identyfikacji związków modulujących tę redystrybucję. Stabilna linia komórkowa została wyhodowana z pojedynczego klonu komórkowego. Regulacja genów CTNNB1 i LMNB1 oraz odpowiadająca im funkcja białka są zachowane w przeciwieństwie do linii komórkowych wykazujących nadekspresję z egzogennego promotora.

Biochem/physiol Actions

β-katenina kodowana przez gen CTNNB1 jest wielofunkcyjnym białkiem. Ułatwia różnicowanie adhezji komórka-komórka i transformację błony nabłonkowej (EMT). Ponadto odgrywa istotną rolę w szlaku sygnałowym WNT. Mutacja w tym genie prowadzi do raka jelita grubego. Jądrowy lamin B1 kodowany przez gen LMNB1 jest białkiem filamentu pośredniego otoczki jądrowej. Białko wykazuje transkrypcyjną aktywność koregulacyjną i odgrywa kluczową rolę w replikacji DNA, starzeniu komórkowym i odpowiedzi na stres. Nadekspresję genu zaobserwowano u pacjentów z rakiem wątrobowokomórkowym (HCC). W związku z tym LMNB1 może być wykorzystywany jako potencjalny biomarker dla HCC.

Features and Benefits

Ukierunkowana integracja fluorescencyjnego znacznika 3XFLAG-GFP tuż za kodonem startowym ATG genu CTNNB1 na chromosomie 3p22.1 i fluorescencyjnego znacznika RFP tuż za kodonem startowym ATG genu LMNNB1 na chromosomie 5q23.2 w celu stworzenia linii komórkowej wykazującej stabilną ekspresję dwóch transgenów.

Komórki A549 są przylegające, a czas podwojenia wynosi około 22 godzin.

Preparation Note

Podłoże należy wymieniać dwa do trzech razy w tygodniu.

Szybko rozmrozić fiolkę poprzez delikatne mieszanie w łaźni wodnej o temperaturze 37°C (~2 minuty), trzymając korek fiolki z dala od wody. Odkazić 70% etanolem, dodać 9 ml podłoża hodowlanego i odwirować 125 x g (5-7 minut). Ponownie zawiesić w kompletnym podłożu hodowlanym i inkubować w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2.

Współczynnik podhodowli: ok. 1:3-1:8

Podstawowym podłożem dla tej linii komórek jest F12 Ham Medium, nr kat. Nr kat. N4888. Aby uzyskać kompletną pożywkę wzrostową, należy dodać następujące składniki do pożywki podstawowej: płodową surowicę bydlęcą, nr kat. Nr kat. F4135, do końcowego stężenia (v/v) 10% i L-glutaminę, Nr kat. Nr kat. G7513, w końcowym stężeniu 2 mM.

Pożywka do zamrażania komórek - DMSO 1X, Nr kat. Nr kat. C6164.

Analysis Note

Tested for Mycoplasma, sterility, post-freeze viability, short terminal repeat (STR) analysis for cell line identification, cytochrome oxidase I (COI) analysis for cell line species confirmation.

Legal Information

3xFLAG is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

CompoZr is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

This product is regulated in France when intended for scientific purposes, including import, export, and conservation activities (Articles L.1211-1, paragraph 2, and L.1243-4 of the French Public Health Code). The purchaser (i.e. end user) is required to obtain an import authorization from the France Ministry responsible for Research (as referenced in Article L.1245-5-1 II of the French Public Health Code) or a conservation authorization from the same ministry (as referenced in Article L.1243-4 of the French Public Health Code). By placing an order for this product, you confirm that you have obtained the appropriate import or conservation authorization for the product. For more information regarding the use of human biological samples for research purposes in France, please contact the relevant French authorities.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 3
• Temperatura zapłonu (°F): 188.6 °F - closed cup
• Temperatura zapłonu (°C): 87 °C - closed cup