Przejdź do
OGS165
PSF-T7-NH2-OMPA SP-NCOI - PLAZMID WYDZIELANIA BAKTERYJNEGO
plasmid vector for molecular cloning
Synonim(y):
szybki wektor
Zaloguj się, aby wyświetlić ceny organizacyjne i kontraktowe.
Informacje o tej pozycji
NACRES:
NA.85
UNSPSC Code:
12352200
Promoter:
Promoter name: T7
Promoter activity: inducible
Promoter type: phage
Promoter activity: inducible
Promoter type: phage
Origin of replication:
pUC (500 copies)
Bacteria selection:
kanamycin
Reporter gene:
none
Peptide cleavage:
no cleavage
form
buffered aqueous solution
mol wt
size 3900 bp
bacteria selection
kanamycin
origin of replication
pUC (500 copies)
peptide cleavage
no cleavage
peptide tag location
N-terminal
promoter
Promoter name: T7
Promoter activity: inducible
Promoter type: phage
reporter gene
none
secretion signal
OmpA
shipped in
ambient
storage temp.
−20°C
General description
Wektor ten umożliwia transkrypcję niepoliadenylowanego i niekapsułkowanego RNA przy użyciu polimerazy bakteriofaga T7. Wektor ten zawiera również peptyd sygnałowy wydzielniczego białka błony zewnętrznej A (OmpA) Escherichia coli (E. coli). Umieszczony na N-końcu białka powinien kierować białko do wydzielania z cytozolu bakteryjnego do przestrzeni peryplazmatycznej. Znacznik wydzielniczy OmpA ma długość 21 aminokwasów. Sekwencja białkowego peptydu sygnałowego to MKKTAIAVALAGFATVAQA. Rozszczepienie następuje po ostatniej reszcie alaniny. Znacznik peptydowy zostanie odcięty od dojrzałego białka podczas eksportu. W tym wektorze sekwencja kodująca peptyd sygnałowy została umieszczona w sąsiedztwie miejsca restrykcji NcoI.
Technika ta może być stosowana w celu zwiększenia tworzenia wiązań dwusiarczkowych, a także zmniejsza degradację proteolityczną. Metoda ta zmniejsza również zanieczyszczenie endogennymi białkami, ponieważ bardzo niewiele białek E. coli jest wydzielanych. Część białka wydzielanego do przestrzeni peryplazmatycznej może być również ekstrahowana z pożywki wzrostowej. Nadal nie jest jasne, dlaczego tak się dzieje, ale uważa się, że odzwierciedla to zwiększoną przepuszczalność błony zewnętrznej, szczególnie podczas dłuższych okresów hodowli.
Wydzielanie białek w E. coli może być czasami trudne. Potencjalne problemy obejmują toksyczność białka w peryplazmie, zmienną wydajność wydzielania, tworzenie ciałek inkluzyjnych w cytoplazmie przy użyciu silnych promotorów, nieprawidłowe tworzenie dwusiarczków. Informacje ogólne na temat bakteryjnych systemów wydzielania, w tym możliwe rozwiązania tych problemów, można znaleźć w Choi et al 2004 Applied Microbiology and Biotechnology 64 (625-635).
wszystkie nasze wektory (z wyjątkiem tych w kategorii terminatorów na naszej stronie internetowej) będą zawierały terminator T7 za miejscem wielokrotnego klonowania. Umożliwi to zakończenie transkrypcji.
Poziom ekspresji promotora:
Technika ta może być stosowana w celu zwiększenia tworzenia wiązań dwusiarczkowych, a także zmniejsza degradację proteolityczną. Metoda ta zmniejsza również zanieczyszczenie endogennymi białkami, ponieważ bardzo niewiele białek E. coli jest wydzielanych. Część białka wydzielanego do przestrzeni peryplazmatycznej może być również ekstrahowana z pożywki wzrostowej. Nadal nie jest jasne, dlaczego tak się dzieje, ale uważa się, że odzwierciedla to zwiększoną przepuszczalność błony zewnętrznej, szczególnie podczas dłuższych okresów hodowli.
Wydzielanie białek w E. coli może być czasami trudne. Potencjalne problemy obejmują toksyczność białka w peryplazmie, zmienną wydajność wydzielania, tworzenie ciałek inkluzyjnych w cytoplazmie przy użyciu silnych promotorów, nieprawidłowe tworzenie dwusiarczków. Informacje ogólne na temat bakteryjnych systemów wydzielania, w tym możliwe rozwiązania tych problemów, można znaleźć w Choi et al 2004 Applied Microbiology and Biotechnology 64 (625-635).
wszystkie nasze wektory (z wyjątkiem tych w kategorii terminatorów na naszej stronie internetowej) będą zawierały terminator T7 za miejscem wielokrotnego klonowania. Umożliwi to zakończenie transkrypcji.
Poziom ekspresji promotora:
Application
Klonowanie w genie: Wektor ten został zaprojektowany w celu umożliwienia dodania znacznika peptydowego na końcu białka będącego przedmiotem zainteresowania przy użyciu standardowych technik klonowania. Uwagi dotyczące wielu miejsc klonowania:
W miejscu NcoI znajduje się kodon startowy, który w razie potrzeby można usunąć przez trawienie KpnI. MCS dla wstawień genów rozciąga się od NotI do XbaI, jednak znacznik znajduje się między miejscami NotI i HindIII. Istnieją sekwencje Shine-Dalgarno i sekwencje KOZAK dopasowane do kodonu startowego znacznika peptydowego.
Miejsca ClaI do NheI mają inne funkcje, takie jak dodawanie C-końcowych znaczników peptydowych, drugich promotorów lub składników ekspresji IRES. Miejsca restrykcyjne BsgI i BseRI rozszczepiają się w obrębie kodonu stop w miejscu XbaI i umożliwiają retrospektywną fuzję C-końcowych sekwencji znaczników peptydowych, jeśli kodon stop jest umieszczony w tej pozycji.
W miejscu NcoI znajduje się kodon startowy, który w razie potrzeby można usunąć przez trawienie KpnI. MCS dla wstawień genów rozciąga się od NotI do XbaI, jednak znacznik znajduje się między miejscami NotI i HindIII. Istnieją sekwencje Shine-Dalgarno i sekwencje KOZAK dopasowane do kodonu startowego znacznika peptydowego.
Miejsca ClaI do NheI mają inne funkcje, takie jak dodawanie C-końcowych znaczników peptydowych, drugich promotorów lub składników ekspresji IRES. Miejsca restrykcyjne BsgI i BseRI rozszczepiają się w obrębie kodonu stop w miejscu XbaI i umożliwiają retrospektywną fuzję C-końcowych sekwencji znaczników peptydowych, jeśli kodon stop jest umieszczony w tej pozycji.
Analysis Note
Aby wyświetlić certyfikat analizy tego produktu, należy odwiedzić stronę www.oxgene.com .
Other Notes
Aby wyświetlić informacje o sekwencji dla tego produktu, odwiedź stronę produktu .
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Klasa składowania
12 - Non Combustible Liquids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
Wybierz jedną z najnowszych wersji:
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.