Przejdź do
OGS268
PSF-AD5 - PLAZMID ADENOWIRUSA TYPU 5
plasmid vector for molecular cloning
Synonim(y):
szybki wektor
Zaloguj się, aby wyświetlić ceny organizacyjne i kontraktowe.
Informacje o tej pozycji
NACRES:
NA.85
UNSPSC Code:
12352200
Origin of replication:
BR322 (15 copies)
Bacteria selection:
kanamycin
Reporter gene:
none
Peptide cleavage:
no cleavage
form
buffered aqueous solution
mol wt
size 4034 bp
technique(s)
molecular cloning: suitable
bacteria selection
kanamycin
origin of replication
BR322 (15 copies)
peptide cleavage
no cleavage
reporter gene
none
shipped in
ambient
storage temp.
−20°C
General description
Jest to wektor wirusa adenowirusa serotypu 5, który umożliwia wprowadzenie genów do pozycji E1A w wirusie. Wektor zawiera delecję E1 i E3 i został zmodyfikowany w celu usunięcia wielu kluczowych miejsc resekcji. Plazmid zawiera małe miejsce wielokrotnego klonowania składające się z AsiSI ClaI i PacI. Miejsca te można znaleźć we wszystkich wektorach plazmidowych w naszym asortymencie produktów, co pozwala na bezpośrednie klonowanie segmentów z naszych plazmidów katalogowych do genomu adenowirusa (więcej szczegółów w zakładce klonowanie). Wektor zawiera również niebiesko-białą kasetę przesiewową, która umożliwia wykrywanie klonów bakteryjnych niosących nowo wprowadzone DNA.
Pojemność opakowania: Genom wirusa typu wiltype wynosi 35938 par zasad, ale w tym wektorze genom został skrócony przez delecje, aby uzyskać 30501 par zasad. Pozwala to na wstawienie do 5,5 kb egzogennego DNA. Wcześniej wykazano również, że genomy adenowirusów serotypu 5 mogą pomieścić insercje do 105% całkowitej długości genomu w porównaniu z typem dzikim. Z tego powodu powinno być możliwe wstawienie dodatkowego 1. 7kb, co daje całkowity rozmiar insercji 7,2Kb. Wcześniej pakowaliśmy wirusy do 105% genomu wirusa z dobrą stabilnością, ale niektóre insercje mogą być niestabilne przy tej długości w zależności od sekwencji. Liczby te są zatem podawane wyłącznie jako wytyczne.
Odzyskiwanie i wzrost: Odzyskiwanie wirusa wymaga dwóch etapów: najpierw plazmid musi zostać rozszczepiony enzymem restrykcyjnym SwaI w celu linearyzacji genomu wirusa. Następnie liniowy genom musi zostać odzyskany i wyhodowany w komórkach 293 lub dowolnej pochodnej komórek 293, takich jak komórki 293As i 293T. Linie te zawierają i wyrażają białko adenowirusa E1A, które transkomplementuje delecję w regionie E1A w tym plazmidzie. Typowa transfekcja regeneracyjna zużywa około 5ug DNA. Nie jest konieczne usuwanie szkieletu plazmidu po linearyzacji DNA, wystarczy standardowe czyszczenie DNA zamiast ekstrakcji żelowej. Kolonie wirusa powinny pojawić się około 10-15 dni po transfekcji do komórek 293; jednak klony mogą czasami pojawiać się we wcześniejszych punktach czasowych. Komórki powinny być hodowane w 2% płodowej surowicy cielęcej, aby zapobiec nadmiernemu wzrostowi w tym czasie.
Poziom ekspresji promotora:
Pojemność opakowania: Genom wirusa typu wiltype wynosi 35938 par zasad, ale w tym wektorze genom został skrócony przez delecje, aby uzyskać 30501 par zasad. Pozwala to na wstawienie do 5,5 kb egzogennego DNA. Wcześniej wykazano również, że genomy adenowirusów serotypu 5 mogą pomieścić insercje do 105% całkowitej długości genomu w porównaniu z typem dzikim. Z tego powodu powinno być możliwe wstawienie dodatkowego 1. 7kb, co daje całkowity rozmiar insercji 7,2Kb. Wcześniej pakowaliśmy wirusy do 105% genomu wirusa z dobrą stabilnością, ale niektóre insercje mogą być niestabilne przy tej długości w zależności od sekwencji. Liczby te są zatem podawane wyłącznie jako wytyczne.
Odzyskiwanie i wzrost: Odzyskiwanie wirusa wymaga dwóch etapów: najpierw plazmid musi zostać rozszczepiony enzymem restrykcyjnym SwaI w celu linearyzacji genomu wirusa. Następnie liniowy genom musi zostać odzyskany i wyhodowany w komórkach 293 lub dowolnej pochodnej komórek 293, takich jak komórki 293As i 293T. Linie te zawierają i wyrażają białko adenowirusa E1A, które transkomplementuje delecję w regionie E1A w tym plazmidzie. Typowa transfekcja regeneracyjna zużywa około 5ug DNA. Nie jest konieczne usuwanie szkieletu plazmidu po linearyzacji DNA, wystarczy standardowe czyszczenie DNA zamiast ekstrakcji żelowej. Kolonie wirusa powinny pojawić się około 10-15 dni po transfekcji do komórek 293; jednak klony mogą czasami pojawiać się we wcześniejszych punktach czasowych. Komórki powinny być hodowane w 2% płodowej surowicy cielęcej, aby zapobiec nadmiernemu wzrostowi w tym czasie.
Poziom ekspresji promotora:
Application
Plazmid ten zawiera niereplikujący się wektor adenowirusa serotypu 5, który umożliwia wstawianie kaset ekspresyjnych do regionu E1A (5 główny koniec genomu). Wektor można hodować w komórkach 293 (które wykazują ekspresję adenowirusa E1A) w celu uzyskania preparatów adenowirusa o wysokim mianie.
Aby sklonować kasetę ekspresji do genomu tego wirusa, istnieje wiele możliwych strategii. Można bezpośrednio sklonować dowolną kasetę ekspresyjną z naszej oferty produktów, przecinając plazmid za pomocą AsiSI i PacI i klonując kasetę w tych samych miejscach w genomie wirusa. Można również sklonować ten fragment tylko do miejsca AsiSI lub PacI, ponieważ miejsca te mają ten sam zwis. Zalecamy klonowanie tylko w miejscu PacI, jeśli to możliwe, ponieważ wydajność cięcia za pomocą AsiSI zwykle nie wynosi 100%.
Alternatywnie można użyć Gibson Assembly InFusionHD Seamless GeneArt lub LIC do klonowania w kasecie ekspresyjnej. Można to osiągnąć poprzez amplifikację kasety ekspresyjnej z dowolnego z naszych plazmidów przy użyciu tych starterów:
Starter do przodu w przypadku cięcia genomu wirusa za pomocą AsiSI:
GAAACAAATTCTAGGAGGTACTCCGTATGGCGATCGCGCTCCCGACATC
Starter do przodu w przypadku cięcia genomu wirusa za pomocą PacI:
TGGGGCGGCCGCCATCGATGGGTTAATTAAGGCTCCCGACATCTTGG
Starter odwrotny w przypadku cięcia genomu wirusa za pomocą PacI lub PacI i AsiSI:
GGCACTTCCAGCAGCAGTTTCGGATCGCCGTTAATTAAGTTTCGATAGCC.
Startery te wiążą się z prawie całą gamą naszych plazmidów, przy czym startery do przodu wiążą się przed promotorem (otoczonym przez Bgl2 w naszych wektorach), a startery odwrotne wiążą się za terminatorem po MCS. Pozwala to na amplifikację całej sekcji promotor-gen-terminator. Startery zawierają również ramiona homologiczne do MCS w genomie wirusa, co pozwala na wstawienie amplifikowanego fragmentu PCR przy użyciu dowolnej z wyżej wymienionych technik.
Aby sklonować kasetę ekspresji do genomu tego wirusa, istnieje wiele możliwych strategii. Można bezpośrednio sklonować dowolną kasetę ekspresyjną z naszej oferty produktów, przecinając plazmid za pomocą AsiSI i PacI i klonując kasetę w tych samych miejscach w genomie wirusa. Można również sklonować ten fragment tylko do miejsca AsiSI lub PacI, ponieważ miejsca te mają ten sam zwis. Zalecamy klonowanie tylko w miejscu PacI, jeśli to możliwe, ponieważ wydajność cięcia za pomocą AsiSI zwykle nie wynosi 100%.
Alternatywnie można użyć Gibson Assembly InFusionHD Seamless GeneArt lub LIC do klonowania w kasecie ekspresyjnej. Można to osiągnąć poprzez amplifikację kasety ekspresyjnej z dowolnego z naszych plazmidów przy użyciu tych starterów:
Starter do przodu w przypadku cięcia genomu wirusa za pomocą AsiSI:
GAAACAAATTCTAGGAGGTACTCCGTATGGCGATCGCGCTCCCGACATC
Starter do przodu w przypadku cięcia genomu wirusa za pomocą PacI:
TGGGGCGGCCGCCATCGATGGGTTAATTAAGGCTCCCGACATCTTGG
Starter odwrotny w przypadku cięcia genomu wirusa za pomocą PacI lub PacI i AsiSI:
GGCACTTCCAGCAGCAGTTTCGGATCGCCGTTAATTAAGTTTCGATAGCC.
Startery te wiążą się z prawie całą gamą naszych plazmidów, przy czym startery do przodu wiążą się przed promotorem (otoczonym przez Bgl2 w naszych wektorach), a startery odwrotne wiążą się za terminatorem po MCS. Pozwala to na amplifikację całej sekcji promotor-gen-terminator. Startery zawierają również ramiona homologiczne do MCS w genomie wirusa, co pozwala na wstawienie amplifikowanego fragmentu PCR przy użyciu dowolnej z wyżej wymienionych technik.
Analysis Note
Aby wyświetlić certyfikat analizy dla tego produktu, należy odwiedzić stronę www.oxgene.com .
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Klasa składowania
12 - Non Combustible Liquids
Temperatura zapłonu (°F)
Not applicable
Temperatura zapłonu (°C)
Not applicable
Wybierz jedną z najnowszych wersji:
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.