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载体图谱

MISSION 研发团队与RNAi 联盟 (TRC)科学家合作，创造了一系列有助于成功开展RNAi实验的载体。基础载体 pLKO.1-puro 由 Broad Institute（TRC一员）开发。我们对 TRC 的贡献是多种用于关键对照实验的载体，以及用于定制 shRNA 生产的载体。本页面包含这类载体相关的信息。

pLKO.1-puro 序列（无 shRNA 插入）

TTRC1.5 载体：pLKO.1-puro
TRC1.5 对照载体
TRC1.5 备用载体骨架
TRC2 载体：TRC2-pLKO-puro
诱导型 shRNA 载体
慢病毒包膜载体
参考文献

 TRC1.5载体：pLKO.1-puro载体和应用

TRC1.5 克隆与 TRC1 克隆具有完全相同的载体骨架

pLKO.1-puro 载体的特征支持瞬时或稳定转染 shRNA 以及产生慢病毒颗粒。1使用嘌呤霉素筛选标记筛选稳定的基因沉默，同时通过与兼容的包膜质粒共转染，可在包膜细胞(HEK293T)中生成自失活的不可复制病毒颗粒。2,3作为我们产品组合独有的产品，TRC1.5 包含近 200,000 个克隆——包括逾49,000 个经过验证的克隆。它包含 TRC1 的所有内容，以及针对 2,661 个新人类基因和 2,395 个小鼠基因的另外 39,212 个克隆。与腺病毒或鼠类 MMLV 或 MSCV 逆转录病毒系统不同，慢病毒颗粒可有效感染特定 shRNA 构建体并掺入分化和非分裂细胞（例如神经元和树突细胞）中，克服了使用这些细胞系时的低转染和掺入困难问题。相对于siRNA和其他基于载体的系统，pLKO.1-puro为长期敲低和表型观测、复杂或敏感细胞系（非分裂细胞或原代细胞）转导提供了解决方案，且是一种经济的可再生资源。

pLKO.1-puro 质粒插入 shRNA 后，长度为 7,086 bp，如下方载体图谱所示。无 shRNA 插入片段时，pLKO.1-puro 载体长度为 7,052 bp。此处提供的序列档案是无插入片段的 pLKO.1-puro 载体（7,052 bp）。

TRC1.5载体图谱 (pLKO.1-puro)

siRNA载体

TRC1.5 载体描述及特征

名称描述
cppt中央多聚嘌呤区
hPGK人磷酸甘油酸激酶真核启动子
puroR用于哺乳动物筛选的嘌呤霉素耐受基因
SIN/LTR3' 自失活长末端重复序列
f1 orif1 复制起点
ampR用于细菌筛选的氨苄青霉素耐受基因
pUC oripUC复制起点
5' LTR5'长末端重复序列
PsiRNA包膜信号
RRERev响应元件

 TRC1.5对照载体

我们提供各种对照，助您开展最严格、详实的 shRNA 实验。请访问 shRNA 对照页面了解更多信息

产品用途载体图谱载体档案
SHC001空载体（无shRNA插入片段）对照SHC001
SHC001
SHC002非哺乳动物shRNA对照SHC002
SHC002
SHC003TurboGFP对照SHC003
SHC003
SHC004TurboGFP shRNA 对照SHC004
SHC004
SHC005eGFP shRNA对照SHC005
SHC005
SHC007荧光素酶 shRNA 对照SHC007
SHC007
SHC008B2M shRNA对照SHC008
SHC008
SHC009ARHGDIA shRNA对照SHC009
SHC009
SHC010CMV-TagCFP™ 对照SHC010
SHC010
SHC011CMV-TagYFP™ 对照SHC011
SHC011
SHC012CMV-TagRFP™ 对照SHC012
SHC012
SHC013CMV-TagFP635™ 对照SHC013
SHC013
SHC014UbC-TurboGFP™ 对照SHC014
SHC014
SHC015UbC-TagFP635™ 对照SHC015
SHC015
SHC016非靶标shRNA对照SHC016
SHC016

TRC1.5 备用载体骨架

作为我们标准 shRNA 产品线的一部分，我们提供各种备用载体骨架。通过我们的自定义 MISSION shRNA 订购界面，可直接在质粒 DNA 或慢病毒转导颗粒克隆详情页面在线订购这类载体骨架的 TRC shRNA。如需定制发夹结构，请访问我们的定制克隆页面了解订购详情。

产品用途载体图谱载体档案
pLKO.1-CMV-Neo备用载体骨架pLKO.1-CMV-Neo
pLKO.1-CMV-Neo
pLKO.1-Neo备用载体骨架pLKO.1-Neo
pLKO.1-Neo
pLKO.1-CMV-tGFP备用载体骨架pLKO.1-CMV-tGFP
pLKO.1-CMV-tGFP
pLKO.1-Neo-CMV-tGFP备用载体骨架pLKO.1-Neo-CMV-tGFP
pLKO.1-Neo-CMV-tGFP
pLKO.1-puro-CMV-tGFP备用载体骨架pLKO.1-puro-CMV-tGFP
pLKO.1-puro-CMV-tGFP

我们还提供多种含荧光蛋白或 UbC 启动子的备用载体骨架。这类构建体仅作为定制选项提供。请访问我们的自定义克隆页面，了解订购详情。

产品用途载体图谱载体档案
pLKO.1-puro-CMV-TagCFP™备用载体骨架pLKO.1-puro-CMV-TagCFP
pLKO.1-puro-CMV-TagCFP
pLKO.1-puro-CMV-TagYFP™备用载体骨架pLKO.1-puro-CMV-TagYFP
pLKO.1-puro-CMV-TagYFP
pLKO.1-puro-CMV-TagRFP™备用载体骨架pLKO.1-puro-CMV-TagRFP
pLKO.1-puro-CMV-TagRFP
pLKO.1-puro-CMV-TagFP635™备用载体骨架pLKO.1-puro-CMV-TagFP635
pLKO.1-puro-CMV-TagFP635
pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP™备用载体骨架pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP
pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP
pLKO.1-puro-UbC-TagFP635™备用载体骨架pLKO.1-puro-UbC-TagFP635
pLKO.1-puro-UbC-TagFP635

TRC2载体：TRC2-pLKO-puro载体和应用

TRC2-pLKO-puro 载体还可用于瞬时或稳定转染 shRNA 以及慢病毒颗粒生产。TRC1.5 载体和 TRC2 载体之间的唯一区别是添加了 WPRE（土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件）。4此元件可增强慢病毒递送的转基因表达。5与 TRC1.5 一样，TRC2 通过嘌呤霉素筛选标记实现稳定的基因沉默。利用表达载体与相容包装质粒共转染包装细胞(HEK293T)，可生产自灭活复制缺陷病毒颗粒。pLKO.1-puro为长期敲低和表型观测、复杂或敏感细胞系（非分裂细胞或原代细胞）转导以及增强转基因表达提供了解决方案。

插入 shRNA 后，TRC2-pLKO-puro 质粒长度为 7,518 bp，如下方载体图谱所示。无 shRNA 插入片段时，TRC2-pLKO-puro 载体长度为 7,484 bp。此处提供的序列档案是无插入片段的 TRC2-pLKO-puro 载体（7,484 bp）。

TRC2-pLKO-puro 序列（无 shRNA 插入） 

TRC2 载体图谱 (TRC2-pLKO-puro)

trc2-plko-puro
名称描述
cppt中央多聚嘌呤区
hPGK人磷酸甘油酸激酶真核启动子
puroR用于哺乳动物筛选的嘌呤霉素耐受基因
WPRE土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件
SIN/LTR3' 自失活长末端重复序列
f1 orif1 复制起点
ampR用于细菌筛选的氨苄青霉素耐受基因
pUC oripUC复制起点
5' LTR5'长末端重复序列
PsiRNA包膜信号
RRERev响应元件
TRC2 载体描述及特征
产品用途载体图谱载体档案
SHC201空 TRC2 载体（无shRNA插入片段）对照SHC201
SHC201
SHC202非靶标shRNA对照SHC202
SHC202
SHC203TurboGFP对照SHC203
SHC203
SHC204TurboGFP shRNA 对照SHC204
SHC204
TRC2对照载体

请注意：目前，TRC2 暂无备用载体骨架。

 诱导型 shRNA 载体

pLKO 载体经过重新设计，包含 LacI（阻遏蛋白）以及带有 LacO（操纵基因）序列的修饰人 U6 shRNA 启动子。无 IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，一种乳糖类似物）的情况下，LacI 可与 LacO 结合，阻止 shRNA 表达。存在 IPTG 时，变构 LacI 阻遏蛋白会改变构象，从 lacO 修饰的人 U6 启动子中释放，从而允许 shRNA 表达。

我们非常自豪可针对实际研究同时提供两种不同的 IPTG 诱导型载体。首选诱导型载体pLKO-puro-IPTG-3xLacO包含三个 lac 操纵子序列（两个位于 U6 启动子中，一个位于启动子 3' 端），可提供严格的调控和良好的基因沉默效果。而 pLKO-puro-IPTG-1xLacO 载体的 U6 启动子包含单个 lac 操纵子序列，有利于 shRNA 表达，但在未诱导时对启动子可控性较差。

产品用途载体图谱载体档案
pLKO-puro-IPTG-1xLacO备用载体骨架pLKO-puro-IPTG-1xLacO
pLKO-puro-IPTG-1xLacO
pLKO-puro-IPTG-3xLacO备用载体骨架pLKO-puro-IPTG-3xLacO
pLKO-puro-IPTG-3xLacO

 慢病毒包膜载体

最后，如客户希望自行包膜慢病毒，我们还可提供优化的包膜混合物。请访问包膜混合物页面了解更多详情。

产品用途载体图谱载体档案
SHP001
pMISSIONgagpol		包膜载体 #1pMISSIONgagpol
pMISSIONgagpol
SHP001
pMISSIONvsvg		包膜载体 #2pMISSIONvsvg
pMISSIONvsvg

参考文献

1.
Stewart, S. A. et al. Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells. RNA 2003, 9, 493–501.. https://doi.org/10.1261/rna.2192803
2.
Zufferey, R. et al. Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo. Nat. Biotechnol 1997, 15, 871–85.. https://doi.org/10.1038/nbt0997-871
3.
Zufferey, R. et al. Self-inactivating lentivirus vector for safe and efficient in vivo gene delivery. J. Virol. 1998, 72, 9873–80.. https://doi.org/10.1128/JVI.72.12.9873-9880.1998
4.
Donello J. E. et al. Woodchuck hepatitis virus contains a tripartite posttranscriptional regulatory element. J. Virol. 1998, 72, 5085-92.. https://doi.org/10.1128/JVI.72.6.5085-5092.1998
5.
Zufferey, R. et al. Woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element enhances expression of transgenes delivered by retroviral vectors. J. Virol. 1999, 73, 2886-92.. https://doi.org/10.1128/JVI.73.4.2886-2892.1999

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