วิธีการเจริญเติบโตของยีสต์

ยีสต์ได้รับการพิจารณาว่าเป็นระบบต้นแบบสำหรับการศึกษา eukaryotic เนื่องจากมีการเติบโตอย่างรวดเร็วและมีการกระจายตัวของเซลล์ ยิ่งไปกว่านั้นการชุบแบบ replica และการแยกเซลล์ยีสต์ที่กลายพันธุ์จะทำได้อย่างง่ายดายเนื่องจากมีระบบพันธุกรรมที่กำหนดไว้อย่างดี มากที่สุดอย่างมีนัยสำคัญยีสต์มีระบบการแปลงดีเอ็นเอที่หลากหลายสูงที่สามารถนำมาใช้อย่างมีประสิทธิภาพสำหรับการผลิตโปรตีน

ยีสต์มักปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อ YPD “Y”ใน YPD หมายถึงสารสกัดจากยีสต์ที่มีสารประกอบที่ละลายน้ำได้ที่สร้างขึ้นเมื่อยีสต์ถูกบังคับให้ย่อยด้วยตนเอง “P”หมายถึง peptone ซึ่งเป็นส่วนผสมของเปปไทด์และกรดอะมิโนที่เตรียมโดยการย่อยโปรตีนจากสัตว์ด้วยโปรตีเอส “D”หมายถึงเดกซ์โทรสหรือกลูโคสซึ่งเป็นแหล่งของคาร์บอนสำหรับยีสต์ YPD มีสารอาหารที่จำเป็นเพื่อตอบสนองความต้องการการเผาผลาญของเซลล์ อย่างไรก็ตามสื่อบางชนิดต้องมีการจัดองค์ประกอบที่กำหนดไว้เพื่อตอบสนองความต้องการในการใช้งานสื่อสังเคราะห์ที่หลากหลายได้รับการพัฒนาขึ้น ส่วนประกอบแต่ละส่วนของสื่อสังเคราะห์อาจได้รับการปรับเปลี่ยนเพื่อให้เหมาะกับความต้องการของการทดลอง

Section Overview

• โปรโตคอลการเจริญเติบโตของยีสต์ในสื่อที่แตกต่างกัน
• การเก็บรักษาและฟื้นฟูความเครียดยีสต์
• Yeast Cultures
  • Yeast Culture Media
  • อาหารเสริมสังเคราะห์แบบ Drop-out Medium
  • อาหารเสริมอื่นๆสำหรับวัฒนธรรมยีสต์

โปรโตคอลการเจริญเติบโตสำหรับยีสต์ในสื่อที่แตกต่างกัน

โปรโตคอลที่ระบุไว้ด้านล่างสามารถใช้สำหรับการเจริญเติบโตและการบำรุงรักษายีสต์ในสื่อของเหลวและของแข็ง:

การเจริญเติบโตของยีสต์ใน YPD Broth

1. พักผลิตภัณฑ์ YPD Broth 50 กรัม (หมายเลขผลิตภัณฑ์Y1375h)ในน้ำกลั่น 1 ลิตร
2. Autoclave เป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 121°C
3. เพาะเชื้อยีสต์ (ที่มาจากน้ำซุป/แผ่นยีสต์) ในหลอด/ขวดที่ปราศจากสารซักฟอกที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียมไว้ อาหารเลี้ยงเชื้อไม่ควรเกินหนึ่งในสามของปริมาตรหลอดเพาะเชื้อหรือหนึ่งในห้าของปริมาตรขวดทั้งหมด
4. วนเนื้อหาเป็นเวลาสั้นๆเพื่อกระจายเซลล์
5. ปลูกวัฒนธรรมในตู้บ่มเพาะเชื้อที่อุณหภูมิ 300 รอบต่อนาที (สำหรับขวด) หรือ 350 รอบต่อนาที (สำหรับหลอดเพาะเชื้อ)

การเจริญเติบโตของยีสต์ใน YPD Agar

1. ระงับ YPD Agar 65 กรัม (หมายเลขผลิตภัณฑ์Y1500)ในน้ำกลั่น 1 ลิตร
2. ให้ความร้อนเดือดในขณะที่คนเพื่อละลายส่วนผสมทั้งหมดอย่างสมบูรณ์
3. Autoclave เป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 121°C
4. เทอาหารเลี้ยงเชื้อ agar ประมาณ 25-30 มล. ลงบนแผ่นความร้อนที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วปล่อยให้อยู่ในช่องไหลแบบ Laminar
5. สเตรค (ยีสต์ที่ได้จากแผ่น YPD)/ การแพร่กระจาย (ยีสต์ที่มาจากการเพาะเชื้อในน้ำซุป) บนแผ่นวุ้นและบ่มที่อุณหภูมิ 30°C

หมายเหตุ: อาจสังเกตพบเชื้อยีสต์ชนิดเดียวหลังจากผ่านไปประมาณ 24 ชั่วโมงแต่ต้องบ่มนานกว่า 48 ชั่วโมงก่อนจึงจะสามารถนำไปใช้เพื่อการชุบซ้ำได้ อัตราการเติบโตของวัฒนธรรมยีสต์โดยใช้ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารแบบหยดออกจากสารสังเคราะห์จะช้าลงประมาณ 50%

การเก็บรักษาความเครียดยีสต์และการฟื้นฟู

เซลล์ยีสต์ที่ปลูกโดยใช้วิธีการข้างต้นสามารถเก็บไว้แช่แข็งในกลีเซอรอลที่ -70°C มานานกว่า 3 ปีหรือในสารแขวนลอยขนาดกลางที่อุดมไปด้วยที่ 4°C เป็นเวลา 6 เดือนถึงหนึ่งปี แผ่น YPD ที่มีเซลล์ยีสต์สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C เป็นเวลา 2-3 เดือนปิดผนึกด้วย Parafilm ® โปรโตคอลสำหรับการเก็บรักษาและฟื้นฟูเซลล์ยีสต์มีดังต่อไปนี้:

การเก็บรักษาเซลล์ยีสต์

1. เตรียมสารละลายกลีเซอรอลที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 30 เปอร์เซ็นต์ (w/v) (หมายเลขผลิตภัณฑ์G5516)
2. เติมสารละลายกลีเซอรอล 1.0 มล. ลงในขวดไขควงปลอดเชื้อขนาด 4 มล
3. ใช้น้ำซุปยีสต์ระยะเริ่มต้นที่อยู่กับที่/เก็บบันทึกช่วงปลาย 1.0 มล. ขูดลูกตุ้มขนาดใหญ่ออกจากจานที่เพิ่งปลูกใหม่
4. ระงับการใช้งานใหม่ในสารละลายกลีเซอรอลที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 30 เปอร์เซ็นต์ 1 มล
5. ผสมแช่แข็งบนน้ำแข็งแห้งและเก็บที่อุณหภูมิ– 70°C

หมายเหตุ: เซลล์ยีสต์ยังสามารถเก็บไว้ในทำนองเดียวกันโดยใช้ 8% (v/v) dimethylsulfoxide (DMSO หมายเลขผลิตภัณฑ์D8418)

การฟื้นฟูความเครียดยีสต์

1. ขูดสต็อกแช่แข็งด้วยไม้จิ้มฟันที่ผ่านการฆ่าเชื้อหรือเข็มแบคทีเรีย
2. สเตรคเซลล์ยีสต์บนจานที่เหมาะสมและบ่มที่อุณหภูมิ 30°C

หมายเหตุ: หลีกเลี่ยงการละลายน้ำแข็งในสต็อก ในกรณีที่สต็อกละลายแล้วให้แช่น้ำวนก่อนแช่แข็งอีกครั้ง

YEAST CULTURES

ยีสต์มักจะปลูกใน YPD หรือสื่อสังเคราะห์ที่ 30°C เรานำเสนอสื่อการเจริญเติบโตและผลิตภัณฑ์เสริมอาหารที่หลากหลายสำหรับการใช้งานเฉพาะของคุณทั้งในรูปแบบผงและของเหลว

สินค้าที่เกี่ยวข้อง

Yeast Culture Media

ขออภัย เกิดข้อผิดพลาดที่ไม่คาดคิด

Response not successful: Received status code 500

ขออภัย เกิดข้อผิดพลาดที่ไม่คาดคิด

Response not successful: Received status code 500

ขออภัย เกิดข้อผิดพลาดที่ไม่คาดคิด

Response not successful: Received status code 500

อาหารเสริมแบบสังเคราะห์แบบหยดออก (ใช้ร่วมกับฐานไนโตรเจนยีสต์ที่ไม่มีกรดอะมิโนหมายเลขผลิตภัณฑ์ Y0626)

อาหารเสริมแบบสังเคราะห์แบบหยดออก (ใช้ร่วมกับฐานไนโตรเจนยีสต์ที่ไม่มีกรดอะมิโนหมายเลขผลิตภัณฑ์ Y0626)

ขออภัย เกิดข้อผิดพลาดที่ไม่คาดคิด

Response not successful: Received status code 500

อาหารเสริมอื่นๆสำหรับวัฒนธรรมยีสต์

ขออภัย เกิดข้อผิดพลาดที่ไม่คาดคิด

Response not successful: Received status code 500

ข้อมูลอ้างอิง

1. Sherman F. 2002. Getting started with yeast.3-41. https://doi.org/10.1016/s0076-6879(02)50954-x

2. MacDonald PN. 2001. Two-Hybrid Systems. https://doi.org/10.1385/1592592104

3. Treco DA, Winston F. 2008. Growth and Manipulation of Yeast. Current Protocols in Molecular Biology. 82(1): https://doi.org/10.1002/0471142727.mb1302s82

4. Schiestl RH, Gietz RD. 1989. High efficiency transformation of intact yeast cells using single stranded nucleic acids as a carrier. Curr Genet. 16(5-6):339-346. https://doi.org/10.1007/bf00340712

5. Li B, Fields S. 1993. Identification of mutations in p53 that affect its binding to SV40 large T antigen by using the yeast two?hybrid system. FASEB j.. 7(10):957-963. https://doi.org/10.1096/fasebj.7.10.8344494