核酸標籤與檢測

核酸標籤和探針

核酸可以在整個分子或 5" 和 3" 端進行標籤。核酸探針對雜交分析特別有用，例如在 northern 印迹中檢測 RNA 或在 Southern 印迹中檢測 DNA。有多種標記方法可用來將標記分佈在整個探針上，包括使用標記的脫氧核苷酸 (dNTP) 或核苷酸三磷酸鹽 (NTP) 進行 PCR、隨機引物和缺口翻譯。末端標記對於研究核酸與蛋白質互動的實驗特別有用，可以避免固態障礙。

核酸標記與檢測實驗

依據標記方法的不同，比色檢測通常用於酶標記探針，而自動放射檢測則適用於放射性探針。常見的探針包括地高辛（DIG）和螢光素標示探針，當與比色反應（如鹼性磷酸酶）結合時，可結合使用，方便多色探針檢測。同樣地，使用 PCR 結合 Biotin-16-dUTP 也可以用於大多數的 DNA 聚合酶，作為額外的標記和檢測方法。螢光原位雜交 (FISH) 使用螢光探針來檢測 DNA 序列，成功的檢測和下游分析部分取決於研究人員可用的螢光顯微鏡的靈敏度和解析度。

標記 DNA 和 RNA 的應用

將大分子轉移到固相膜上稱為印記。由於標記探針的特異性，核酸與探針的雜交為研究人員提供了在複雜的核酸混合物中檢測 DNA 與 RNA 序列的能力。此外，這些方法還可收集其他有價值的資訊，包括分析基因表達、mRNA 大小和拷貝數，視測試結果而定。 研究人員也常用原位雜交來檢測一個或多個不同標記的探針（例如 DIG 和螢光素標籤探針）。