Las fibronectinas (FN) son glucoproteínas adhesivas de elevada masa molecular presentes en la matriz extracelular (ECM) y los líquidos corporales. Es un dímero compuesto por dos subunidades unidas por dos enlaces disulfuro. Cada monómero de FN consta de tres tipos de unidades repetidas: 12 repeticiones de FN de tipo I (aproximadamente 40 aminoácidos cada una), dos repeticiones del tipo II (alrededor de 60 aminoácidos) y 15-17 repeticiones de tipo III (aproximadamente 90 aminoácidos). Estas unidades repetidas contribuyen a la diversidad estructural y funcional de las moléculas de fibronectina.
Application
La fibronectina humana (HFN) es adecuada como factor de fijación en la propagación de las células in vitro cuando se emplea para revestir las superficies de los cultivos celulares: material de plástico, material de vidrio y microesferas microportadoras.
Biochem/physiol Actions
La fibronectina desempeña un papel crucial en la mediación de diversas interacciones celulares y participa en varios procesos, como la adhesión celular, el establecimiento y el mantenimiento de la morfología celular, la migración, el crecimiento y la diferenciación celulares. Interactúa con varias proteínas de la matriz extracelular (ECM) y de la superficie celular, como el colágeno, la heparina, la fibrina y receptores específicos de la membrana celular. La fibronectina también puede actuar como ligando para múltiples integrinas, entre ellas el conocido receptor de fibronectina alpha5-beta1, que se une a la secuencia arginina glicina ácido aspártico (RGD) en la región de repetición III-10 de la fibronectina. Esta extensa red de interacciones destaca la importancia de la fibronectina en la regulación del comportamiento celular y la mediación de la función tisular.
Physical form
Líquido en disolución salina tamponada con tris (TBS) 50 mM, pH 7,5, sin conservantes. Liofilizado a partir de disolución salina tamponada con tris (TBS) 50 mM, pH 7,5, sin conservantes (tamaño de envase 100 MG). Reconstituir todo el vial de hFN a 1 mg/ml utilizando una disolución salina estéril equilibrada a 37°C.
Preparation Note
Mantener a 2-8°C durante un máximo de 6 meses desde de la fecha de recepción. No congelar.
Analysis Note
En condiciones reducidas se observa una doble banda de 220 kDa. La hFN se purifica mediante cromatografía de afinidad en gelatina de agarosa, seguida de cromatografía en heparina-agarosa. Se ha cribado el plasma de los donantes y se ha demostrado que son negativos para VIH, HTLV, hepatitis B y C.
Other Notes
Procedimiento sugerido para el recubrimiento del material para cultivo celular
1.Determinar la cantidad de HFN necesaria para recubrir los recipientes de cultivo multiplicando la superficie total (cm2) por la concentración deseada (μg/ml) de HFN. La cantidad recomendada es 2-10 μg/cm2.
2. Humedecer la superficie de cada vaso de cultivo que va a ser revestido con una cantidad mínima de disolución salina equilibrada estéril (sin suero ni proteínas) requerida para cubrir toda la superficie.
3. Introducir la atmósfera de CO2 adecuada, si es necesario
4.Añadir la cantidad calculada de HFN a cada vaso de cultivo.
5.Permitir que la HFN se adsorba a la superficie del vaso durante 5-20 minutos.
6.Retire la disolución salina equilibrada residual antes de continuar con los procedimientos convencionales de cultivo celular
El producto se filtra utilizando un filtro de 0,1 micras durante la producción. Se recomienda volver a filtrar el producto antes de su uso o después de la reconstitución.
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