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KOD Heißstart-DNA-Polymerase

High fidelity DNA polymerase designed for accurate PCR amplification of long strand and GC- rich DNA templates for cloning and cDNA amplification applications.

• Synonym(e): High fidelity PCR, Hot start PCR, Hot start polymerase, KOD hot start polymerase
• NACRES: NA.54
• UNSPSC Code: 41106314
• Recombinant: expressed in E. coli
• Concentration: 1.0 U/L

Eigenschaften

• recombinant: expressed in E. coli
• Quality Segment: 200
• usage: sufficient for 1000 reactions, sufficient for 200 reactions
• feature: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR, High Fidelity PCR, dNTPs included, hotstart
• manufacturer/tradename: Novagen^®
• storage condition: OK to freeze
• concentration: 1.0 U/L
• technique(s): PCR: suitable, whole genome amplification: suitable
• input: purified DNA
• suitability: suitable for PCR
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Die PCR beinhaltet die Replikation einer DNA-Matrize durch eine thermostabile DNA-Polymerase. Die Prozessivität, Spezifität und Wiedergabetreue des verwendeten Polymerase-Enzyms können die Effizienz, Reproduzierbarkeit und Ausbeute der PCR-Reaktion beeinflussen. Bei der High-Fidelity-PCR wird eine DNA-Polymerase mit einer geringen Fehlerrate eingesetzt und somit ein hoher Genauigkeitsgrad der Replikation der Ziel-DNA erreicht. Die Wiedergabetreue ist entscheidend, wenn die genaue Sequenz-Amplifikation des Zielgens notwendig ist, beispielsweise bei direkter Sequenzierung oder Klonierung zur Downstream-Proteinexpression. Untersuchungen können durch unerwünschte Mutationen gravierend beeinträchtigt werden. Unsere Analyse hat gezeigt, dass KOD-Enzyme eine gute Wahl für eine schnelle und genaue PCR mit hoher Ausbeute sind. Die Molekularbiologen bei EMD Millipore arbeiten an der Entwicklung und Formulierung von Polymerasen mit der höchsten Spezifität, Wiedergabetreue und Ausbeute bei der PCR-Amplifikation. Weiterhin erhöhen optimierte Pufferzusammensetzungen sowie praktische Master-Mixe und Zyklierungsparameter die Benutzerfreundlichkeit und Reproduzierbarkeit der Daten. Die KOD Hot-Start-DNA-Polymerase* ist ein vorgemischter Komplex aus KOD DNA-Polymerase und zwei monoklonalen Antikörpern, der die DNA-Polymerase- und 3′→5′-Exonuklease-Aktivitäten bei Umgebungstemperaturen hemmt (Mizuguchi 1999). KOD Hot Start amplifiziert genomische DNA-Matrizen bis zu 21 kb einschließlich GC-reicher Gene für PCR-Anwendungen. KOD Hot Start kombiniert die Wiedergabetreue, schnelle Extensionsgeschwindigkeit und hervorragende Prozessivität von KOD mit der hohen Spezifität eines Antikörper-vermittelten Heißstarts. Die unspezifische Amplifikation wird reduziert, da Fehlpriming-Ereignisse, die während der Vorbereitung und des anfänglichen Temperaturanstiegs eintreten können, vermieden werden. Zusätzlich wird die Zersetzung des Primers während der Vorbereitung bei Umgebungstemperatur aufgrund der Exonuklease-Aktivität effektiv gehemmt. Die KOD Hot-Start-DNA-Polymerase erzeugt stumpfendige PCR-Produkte, die für das Klonen mit Novagen Perfectly Blunt^® und LIC-Vector-Kits geeignet sind.

Quelle: Rekombinante Thermococcus kodakaraensis KOD1-DNA-Polymerase wird in E. coli exprimiert
Konzentration: 1,0 E/l
Nicking-Aktivität: Nicht nachweisbar
Amplifikationseffizienz: Funktionelle PCR; gehemmte Aktivität bei 21 °C verifiziert
Lagerung: -20°C

*Von Toyobo hergestellt und von EMD vertrieben. Nicht verfügbar in Japan.

Hinweis: Der Erwerb dieses Produkts schließt eine Immunität gegenüber Rechtsschutzverfahren in Zusammenhang mit den in der Produktbeilage angegebenen Patenten ein, wonach nur die erworbene Menge für die internen Forschungszwecke des Käufers verwendet werden darf. Es werden keine anderen Patentrechte (wie z. B. 5-Nukleaseprozess-Patentrechte) übertragen, weder ausdrücklich noch implizit noch durch Rechtsverwirkung. Weitere Informationen über den Erwerb von Lizenzen erhalten Sie vom Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California, 94404, USA.

Application

KOD Hot-Start-DNA-Polymerase wird wie folgt verwendet:

• Amplifikation von genomischer DNA mit hoher Wiedergabetreue für die Sequenzierung nach Sanger.
• Amplifikation von genomischer DNA zum Screenen von Einzelzell-Klonen für die homozygotische Entfernung des des Ziel-Exons.
• Amplifikation von spezifischen Genfamilien auf der genomischer DNA, die aus Lymphomzellen von Mäusen isoliert wurde.

Features and Benefits

• Hohe Genauigkeit: Ungefähr 80 Mal höhere Wiedergabetreue als konventionelle Taq-DNA-Polymerase
• Long & Accurate PCR: Amplifiziert genomische DNA bis zu 12 kbp sowie Plasmid- und Lambda-DNA-Matrizen bis zu 21 kbp mit geringer Fehlerrate
• Amplifiziert GC-reiche Regionen effizient
• Das Antikörper-vermittelter Hot-Start-Merkmal verringert das Fehlpriming und die Primer-Dimer-Bildung
• Erzeugt PCR-Produkte mit stumpfem Ende, die sich für das Klonen eignen
• Praktische Einrichtung bei Raumtemperatur, die mit Automatisierung kompatibel ist
• Kompatibel mit ortsspezifischen Mutagenese-Protokollen
• Optimaler KOD Hot-Start-Puffer für PCR-Leistung über ein breites Spektrum von Zielen hinweg

Other Notes

•200 U oder 5 × 200 UKOD Hot Start DNA-Polymerase (1,0 U/µL)

•1,2 mL oder 5 × 1,2 mL10X PCR-Puffer für KOD Hot Start DNA-Polymerase

•1 mL oder 5 × 1 mL25 mM MgSO₄

•1 mL oder 5 × 1 mLdNTP Mix (je 2 mM)

Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die die Umsetzung von 10 nmol dNTP in eine säureunlösliche Form in 30 Minuten bei 75°C in einer Reaktion mit 20 mM Tris-HCl (pH-Wert 7,5 bei 25°C), 8 mM MgCl₂, 7,5 mM DTT, 50 µg/mL BSA, jeweils 150 µM dATP, dCTP, dGTP, dTTP (eine Mischung aus unmarkiertem und [³H]dTTP) und 150 µg/mL aktivierter Kalbsthymus-DNA katalysiert.

Mizuguchi, H., et al. 1999. J. Biochem. (Tokio)126, 762. Kitabayashi, M., et al. 2002. Biosci. Biotechnol. Biochem.66 (10), 2194. Fujii, S., et al. 1999. J. Mol. Biol.289, 835.

Legal Information

*Von Toyobo hergestellt und von EMD vertrieben. Der Kauf dieses Produkts schließt eine Immunität gegen eine Klage unter den in der Produktbeilage angegebenen Patenten ein, wonach nur die erworbene Menge für die internen Forschungszwecke des Käufers verwendet werden darf. Es werden keine anderen Patentrechte (wie z. B. 5′-Nukleaseprozess-Patentrechte) übertragen, weder ausdrücklich noch implizit noch durch Rechtsverwirkung. Weitere Informationen über den Erwerb von Lizenzen erhalten Sie vom Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California, 94404, USA.

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Perfectly Blunt is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Toxizität: Standard-Handhabung (A)

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07
• Signalwort: Warning
• Gefahrencodes: H319
• Sicherheitshinweise: P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2
• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• Was ist los?: WGK 2